Produção Nacional
Clonagem do cDNA e sequenciamento parcial do gene que codifica a enzima glutamato desidrogenase hepática de ovino
2013; UNIVERSIDADE DO ESTADO DE SANTA CATARINA; Volume: 12; Issue: 2 Linguagem: Português
ISSN
2238-1171
AutoresSandra Regina de Mello, Kaio César Simiano Tavares, Carlos André da Veiga Lima Rosa, Luiz Cláudio Miletti,
Tópico(s)Nitrogen and Sulfur Effects on Brassica
ResumoA enzima mitocondrial glutamato desidrogenase (GDH: EC 1.4.1.2) catalisa a desaminacao reversivel do L-glutamato para 2-oxoglutarato (α-cetoglutarato) usando o NAD + e NADP + como coenzimas. E uma das mais importantes enzimas hepaticas encontradas em hepatocitos de bovinos, ovinos e caprinos. Infeccoes por Fasciola spp., intoxicacao grave aguda por toxinas de plantas, tais como Xanthium spp. e Senecio spp. e intoxicacao por cobre resultam na liberacao dessa enzima no sangue. O aumento da GDH indica danos ou necrose hepatica em bovinos e ovinos. Esta e a enzima de escolha para avaliar a funcao hepatica dos ruminantes. No presente trabalho o cDNA que codifica a enzima GDH do hepatocito de ovino foi sintetizado por meio de RT-PCR utilizando mRNA extraido do figado de ovino. Parte da regiao de codificacao do cDNA da GDH de ovino foi amplificada por PCR usando oligonucleotideos iniciadores sintetizados a partir do alinhamento de sequencias de ORFs de Ovis aries , Bos taurus , Homo sapiens , Rattus norvegicus e Mus musculus disponiveis em banco de dados. O cDNA foi clonado no vetor pGEM ® -T Easy (Promega) e inserido em celulas calcio-competentes de Escherichia coli DH10B atraves de choque termico. O DNA plasmidial foi purificado e apos o sequenciamento a presenca de um inserto de 1292 pb foi confirmado. O alinhamento da sequencia deduzida de aminoacidos com outras especies revelou alta homologia entre as GDH.
Referência(s)