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Comparação de três protocolos distintos para extração de RNA de amostras fixadas em formalina e emblocadas em parafina

2011; Sociedade Brasileira de Patologia Clínica; Volume: 47; Issue: 6 Linguagem: Português

10.1590/s1676-24442011000600012

1678-4774

Gisele Rodrigues Gouveia, Suzete C. Ferreira, Éster Cerdeira Sabino, Sheila Aparecida Coelho Siqueira, Juliana Pereira,

Molecular Biology Techniques and Applications

INTRODUÇÃO: Tecidos fixados em formalina e emblocados em parafina (FFEP) são importantes fontes de amostras para estudos retrospectivos. Apesar de sua capacidade de preservação de proteínas e morfologia celular, a formalina interfere negativamente em testes de biologia molecular por fragmentar e modificar quimicamente os ácidos nucleicos, particularmente o ácido ribonucleico (RNA). OBJETIVO: Comparar a eficiência de três diferentes protocolos de extração de RNA para análise de expressão gênica de tecidos FFEP. MATERIAL E MÉTODOS: Amostras de linfonodo humano FEEP foram submetidas à extração de RNA utilizando-se os kits Ambion e Arcturus Bioscience e o método clássico de Trizol. Após a extração, o RNA foi quantificado e testado quanto à sua capacidade de amplificação pela reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR) utilizando primers do gene endógeno gliceraldeído-3 fosfato desidrogenase (GAPDH). DISCUSSÃO/CONCLUSÃO: Todos os protocolos testados produziram quantidades adequadas e suficientes de RNA total, entretanto, somente os protocolos com uso dos kits Ambion e Arcturus produziram RNA capaz de ser amplificado pela PCR.