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CARACTERIZACIÓN, AISLAMIENTO Y CULTIVO DE CÉLULAS GERMINALES PRIMORDIALES DE CONEJO

2001; SciELO; Volume: 19; Issue: 2 Linguagem: Espanhol

10.4067/s0716-98682001000200014

0717-6244

Mariana Rojas, Xavier Vignon, M. A. Montenegro, Mariano del Sol, Eduardo Bustos‐Obregón, Jaques Fléchon,

Rabbits: Nutrition, Reproduction, Health

Las celulas germinales primordiales (CGP) obtenidas directamente del embrion, no son capaces de generar lineas celulares pluripotentes, pero ellas adquieren esta capacidad si son mantenidas en cultivos vitro. Los objetivos de este estudio fueron: 1) Caracterizar inmunohistoquimicamente las CGP de conejo en sus distintas etapas embrionarias vivo. 2) Reconocer el lugar optimo para obtener estas celulas segun edad embrionaria. 3) Evaluar si las celulas nutricias murinas permiten la proliferacion y sobrevivencia de las CGP en cultivo in . Se obtuvieron embriones de 16 conejas de raza Neozelandesa blanca, de 7, 9, 10, 14 y 16 dias post coito (dpc). Un grupo de cada camada fue procesado toto y en cortes por congelacion con fosfatasa alcalina y dos anticuerpos monoclonales: TEC-1 (reconoce antigeno SSEA-1 de superficie de las CGP) y PG-2 (marca el citoplasma perimitocondrial de CGP). Otro grupo de embriones fue cultivado durante 22 dias usando celulas nutricias STO y MI-220. En embriones de 7 dias, el epiblasto del disco embrionario presenta celulas TEC-1 positivas y PG-2 negativas. Esta marca se mantiene asi durante la estadia transitoria en el alantoides y durante la migracion a traves del meso intestinal. Cuando las CGP colonizan la gonada se transforman en TEC-1 negativas y PG-2 positivas. La capacidad de proliferacion vitro de las celulas germinales primordiales de conejo, resulto ser mucho menor que la observada en raton. Esto guarda relacion con la reducida capacidad de proliferacion de estas celulas vivo. La eficiencia proliferativa de las CGP vitro se correlaciona con la edad del embrion del cual ellos derivan. Por otra parte la morfologia de las celulas vitro guarda tambien una estrecha relacion con la edad del embrion de la cual ellas son aisladas. La edad optima en la que se obtuvieron mejores proliferacion y sobrevivencia en sucesivos pasajes, fue a los 14 dias (grupo III). Es decir, en el periodo en que ellas estan proliferando y migrando a traves del meso intestinal. Los medios de cultivo de origen murino STO, MI-220 permiten la proliferacion y sobrevivencia de las CGP