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A study of some effects of subculture on two bcg strains

1976; Churchill Livingstone; Volume: 57; Issue: 3 Linguagem: Francês

10.1016/0041-3879(76)90027-1

1878-6006

T.W. Osborn,

Immune responses and vaccinations

A marked improvement in the ability to consistently distinguish between colonies cultured from BCG strain 1331 (Copenhagen), employed for the routine production of Danish freeze-dried BCG vaccine, and those cultured from BCG strain 1077 (Glaxo), employed for the routine production of British freeze-dried BCG vaccine, was obtained in our laboratory by modifying the constituents of a Dubos-type solid medium. Several batches of British BCG vaccine had been specially prepared by the manufacturer, using strain 1331 as seed culture, and samples from these batches were cultured on this medium in our laboratory. Two of the batches produced, in place of the spreading colonies normally cultured from strain 1331, a large majority of nonspreading colonies, normally characteristic of strain 1077. To study this very rapid change, modifications of the system of serial transfers employed routinely by the manufacturer were set up in our laboratory, and the relative proportions of the two colony forms cultivated at each stage of transfer were noted. The rapid changes that had occurred during manufacture were reproduced under our experimental conditions, and it was observed that transfer through deep culture in liquid Dubos medium tended to shift the balance between the numbers of spreading and nonspreading colonies in favour of the latter, whilst the reverse was true of the transfers through deep culture in production medium. The ability to monitor changes occurring in BCG strains during serial transfer should facilitate the provision of measures to prevent such changes taking place. Le fait de changer les composants d'un milieu solide de type Dubos a permis à notre laboratoire d'améliorer beaucoup la possibilité de distinguer de façon répétée et sans erreur entre les colonies cultivées à partir de la souche BCG 1331 (Copenhagee), utilisées pour la production de routine du vaccin BCG danois lyophilisé, et les colonies obtenues à partir de la souche BCG 1077 (Glaxo), utilisées pour la production de routine du vaccin BCG anglais lyophilisé. Plusieurs lots de vaccins anglais avaient été spécialement préeparés par le fabricant en utilisant la souche 1331 comme semence pour les cultures et des échantillons de ces lots ont été cultivés sur ce milieu dans notre laboratoite. Au lieu des colonies à aspect dispersé cultivant habituellement à partir de cette souche 1331, deux des lots ainsi obtenus ont produit une grande majorité de colonies sans tendance à la dispersion, ce qui est caractéristique de la souche 1077. Afin d'étudier ce changement très rapide, notre laboratoire a mis au point des modifications du système de repiquage en séries utilisé de façon routinière par le fabricant et nous avons noté les proportions relatives des deux types de colonies cultivant à chaque étape du repiquage. Les modifications rapides qui étaient survenues au cours de la fabrication ont été reproduites dans nos conditions expérimentales et nous avonsobservé que le repiquage en culture profonde en milieu liquide de Dubos tendait à inverser I'équilibre entre le nombre de colonies tendant à se disperser et celui des colonies sans tendance à la dispersion, cette inversion de I'équilibre se faisant en faveur de ces dernières, alors que c'était ('inverse qui se passait lors des repiquages en culture profonde dans le milieu de production. La capacité de contrôlar et d'agir sur les modifications qui surviennent dans les souches BCG au cours des repiquages successfis devrait faciliter la mise au point de mesures visant à prévenir la survenue de telles modifications. Modificando los constituyentes de un medio sólido tipo Dubos se obtuvo en nuestro laboratorio una marcada facilidad para distinguir entre colonias de cultivo de BCG cepa 1331 (Copenhagen), empleada para la producción rutinaria de la vacuna BCG binamarquesa liofilizada, y colonias de BCG cepa 1077 (Glaxo) empleada para la producción rutinaria de vacuna BCG británica liofilizada. Varias muestras de la BCG británica han sido preparadas especialmente por el fabricante, usando cepa 1331 como semilla de cultivo, y esas muestras fueron cultivadas en este medio en nuestro laboratorio. Dos de los ejemplares produjeron, en lugar de las colonias normalmente extendidas de la cepa 1331, una mayoría de colonias no extendidas, caracterlsticas de la cepa 1077. Para estudiar este cambio ráipido se establecieron modificaciones en el sistema de los pasajes seriados empleados rutinariamente por el fabricante, y se notó una proporción relativa de las dos formas de colonias cultivadas en cada caso. Los cambios rápidos que ocurrieron durante la producción fueron reproducidos en nuestras condiciones experimentales y se observó que el pasaje a un cultivo profundo en medio liquido de Dubos tendió a desplazar el equilibrio entre las colonias extendidas y no extendidas en favor de las últimas mientras que se observó to contrario con el pasaje a un cultivo profundo en los medios de producción. La posibilidad de controlar los cambios que ocurren en [as cepas de BCG durante los pases seriados facilitará la toma de medidas para que esos cambios no se produzcan.