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Die Ermittlung der relativen Beweglichkeit von Serumproteinen in der Agargelelektrophorese

1969; Wiley; Volume: 16; Issue: 6 Linguagem: Alemão

10.1111/j.1439-0450.1969.tb00136.x

0931-2021

W. Matthaeus,

Mass Spectrometry Techniques and Applications

Zusammenfassung Die Bestimmung des elektrophoretischen Verhaltens von Polyvinylalkoholen, Polysacchariden und Polyäthylenglykolen verschiedenen Molekulargewichts dient der Feststellung, welche dieser hochmolekularen Substanzen sich bei der Ermittlung der relativen Beweglichkeit von Serumproteinen in der Agargelelektrophorese am vorteilhaftesten als Markierungssubstanz für den Elektroneutralitätspunkt einsetzen läßt. Polyäthylenglykole zeigen gegenüber den bisher verwendeten Dextranen auch im Gemisch mit Serum den Vorteil, auf ohne Fixierung getrockneten Elektropherogrammen sich ohne chemische Reaktion als scharfe und schmale opake Bande abzuheben und nach ihrer Lokalisierung und der Proteinanfärbung eine unmittelbare Berechnung der elektrophoretischen relativen Beweglichkeit der Serumproteinkomponenten zu gestatten. Für die Serumproteine von Mensch, Schwein und Rind werden die relativen Beweglichkeiten unter Verwendung von Polyglykol 20 000 als Markierungssubstanz für die Nullbeweglichkeit bestimmt und mit den auf Dextranbasis ermittelten Ergebnissen anderer Autoren verglichen. Als anodischer Marker wird Phenolrot empfohlen, um durch unmittelbare Vergleichsmöglichkeiten für die Mobilitäten zwischen den Serumproteinen verschiedener Spezies die unterschiedliche elektrophoretische Beweglichkeit der artspezifischen Serumalbumine zu umgehen. Durch das hier angegebene Trocknungsverfahren werden bei der quantitativen Auswertung der Elektropherogramme für die Proteine konstantere Werte als nach Fixierungsvorbehandlung der Platten erhalten. Herrn E. Schlotterer danke ich für geschickte technische Assistenz und Herrn E. Queissner für die sorgfältige Ausführung der photographischen Arbeiten. Summary The relative mobility of serum proteins in agar gel electrophoresis The determination of the electrophoretic behaviour of polyvinyl alcohols, polysaccharides and polyethylene glycols of differing molecular weights serves to establish which of these high molecular substances are best suited to serve as markers of the electro neutrality point in studies of the relative mobility of serum proteins in agar gel electrophoresis. Compared with dextrans which were formerly employed, polyethylene glycols, even when mixed with serum, are more practical because they separate out in the dry electropherograms without fixation, in the form of a narrow well‐defined opaque band without chemical reaction. They thus make possible from their localisation and protein staining a direct calculation of the relative electrophoretic mobility of the various serum protein components. The relative mobilities of the serum proteins of man, pig and cattle were determined using polyglycol 20,000 as a marker for the mobility null point and the results are compared with dextrans by other workers. Phenol red was used as the anode marker in order to detect the varying electrophoretic mobility of species‐specific serum albumins. The dry technique described enables a quantitative evaluation of the electrophoretogram with more constant values than are obtained by preliminary fixation of the glass slides. Résumé Recherche sur la mobilité relative des protéines sériques dans l'électrophorèse en gélose La détermination du comportement électrophorétique des alcools polyvinyliques, des polysaccharides et des polyéthylène‐glycols de poids moléculaires différents sert à la constatation que ces substances à poids moléculaire élevé peuvent être employées avec succès dans la recherche de la mobilité relative des protéines sériques dans l'électrophorèse en gélose comme indicateurs du point de neutralité électrique. Les polyéthylène‐glycols, même mélangés au sérum, sont d'un emploi plus pratique que les dextranes employés jusqu'ici, car ils se séparent sous forme d'une étroite bande opaque bien délimitée, sans réaction chimique, sur les électrophérogrammes séchés sans fixation, et permettent, après leur localisation et une coloration des protéines, un calcul direct de la mobilité électrophorétique relative des composantes protéiques du sérum. On détermine les mobilités relatives des protéines sériques de l'homme, du porc et du boeuf, en employant de polyglycol 20 000 comme substance de marquage pour la mobilité zéro et l'on compare avec les résultats obtenus par d'autres auteurs avec le dextrane. Pour le marquage anodique, on recommande l'emploi de rouge de phénol pour éluder la mobilité électrophorétiqe variable des albumines spécifiques à l'espèce par des comparaisons possibles directes entre les mobilités des protéines sériques des différentes espèces. Par le procédé de séchage exposé ici, on obtient des valeurs plus constantes dans l'évaluation quantitative des électrophérogrammes des protéines, qu'après une fixation préliminaire des plaques. Resumen Determinación de la movilidad relative de las seroproteínas en la electroforesis sobre agar La valuación del comportamiento electroforético de los alcoholes polivinílicos, polisacáridos y polietilenglicoles de diversos pesos moleculares sirve para establecer cual de estas substancias polimoleculares se puede utilizar, con provecho máximo, como substancia de marcación para el punto de neutralidad eléctrica, en la determinación de la movilidad relativa de las seroproteínas en la electroforesis sobre agar. Los polietilenglicoles presentan la ventaja, frente a los dextranos utilizados hasta ahora, incluso mezclados con suero sanguíneo, de destacarse, sin reacción química, en electroferogramas secados sin fijación, como bandas agudas, delgadas y opacas, y de permitir tras su localización y la coloración de las proteínas el calculo inmediato del movimiento electroforético relativo de los componentes seroproteicos. Para las seroproteínas del hombre, cerdo y vaca se establecieron los movimientos relativos utilizando poliglicol 20.000 como substancia de marcación para la movilidad cero, comparándose con los resultados obtenidos, sobre la base de dextrano, por otros autores. Como marcador anódico se recomienda rojo de fenol, con el fin de eludir mediante las posibilidades inmediatas de comparación para las movilidades entre las seroproteínas de diversas especies, el movimiento electroforético diferente de las seroalbúminas específicas de especie. Por medio de la técnica de desecación indicada aquí se conservan en la valoración cuantitativa de los electroferogramas para las proteínas valores más constantes que tras el pretratamiento de fijación de las placas.