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Análise comparativa da estabilidade do DNA de Dalbulus maidis (DeLong & Wolcott) (Hemiptera: Cicadellidae) sob diferentes métodos de preservação para uso em RAPD-PCR

2002; Springer Nature; Volume: 31; Issue: 2 Linguagem: Português

10.1590/s1519-566x2002000200008

1678-8052

Charles Martins de Oliveira, Maria Helena Pelegrinelli Fungaro, Luís Eduardo Aranha Camargo, João Roberto Spotti Lopes,

Insect symbiosis and bacterial influences

A preservação adequada do DNA de um determinado organismo é fundamental para o sucesso no uso de técnicas moleculares como RAPD-PCR. O objetivo deste trabalho foi comparar métodos simples de preservação de espécimes de Dalbulus maidis (DeLong & Wolcott) (Hemiptera: Cicadellidae) quanto à quantidade e qualidade do DNA para uso em RAPD-PCR, após períodos sucessivos de armazenamento. Avaliaram-se oito métodos: congelamento (-20ºC); álcool etílico 70% (-20ºC e temperatura ambiente); álcool etílico absoluto (-20ºC e temperatura ambiente); secagem ao ar; e preservação em tampão de extração (inseto inteiro e macerado). A intervalos de 10-30 dias, o DNA foi extraído, quantificado e amplificado via RAPD-PCR pelo oligonucleotídeo OPA-04. A qualidade do DNA extraído foi observada em gel de agarose 0,8%. Após 210 dias de armazenamento, o congelamento (-20ºC) mostrou ser a melhor técnica. Quantidades satisfatórias de DNA também foram obtidas dos insetos conservados em álcool etílico absoluto (-20ºC), álcool etílico 70% (-20ºC) e tampão de extração (inseto inteiro e macerado). Insetos conservados em álcool etílico absoluto (temperatura ambiente), em álcool etílico 70% (temperatura ambiente) e secos ao ar mostraram-se impróprios para estudos com RAPD-PCR após 120, 60 e 10 dias de armazenamento, respectivamente.