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Biochemical Properties of Fibrinogen Binding Protein (Clumping Factor) of the Staphylococcal Cell Surface

1986; Gustav Fischer Verlag; Volume: 262; Issue: 3 Linguagem: Inglês

10.1016/s0176-6724(86)80001-3

0176-6724

Yukio Usui,

Protein purification and stability

The staphylococcal fibrinogen binding protein of a strain of coagulase-negative Staphylococcus aureus was purified 229 fold in terms of the haemagglutination unit compared to the starting material by affinity chromatography on fibrinogen-Sepharose. By Polyacrylamide gel electrophoresis in both reduced and unreduced gels, the protein showed one major band and minor bands with relative molecular masses of 62,000, 61,000, and 59,000, respectively. The isoelectric point was between 10.2 and 10.8 determined by isoelectric focusing in Polyacrylamide gel. By the agar diffusion test one band was obtained against anti-whole cell rabbit serum. Amino acid analysis of fibrinogen binding protein showed glycine, glutamic acid, lysine, alanine, aspartic acid, and arginine as the major components. Protein A or teichoic acid extracted from the homologous strain did not show fibrinogen binding activity assayed by haemagglutination and anti-fibrinogen binding activity of anti-whole cell Fab. The amount of the fibrinogen binding protein to absorb the activity of anti-whole cell Fab was decreased to 1/60 of that of the starting material. Sheep red blood cells coated with the fibrinogen binding protein agglutinated in 0.001% (w/v) fibrinogen solution. Das fibrinogenbindende Protein eines koagulasenegativen Staphylococcus aureus-Stammes wurde mittels Affinitäts-Chromatographie auf Fibrinogen-Sepharose 229fach gereinigt, ausgedrückt in Hämagglutinations-Einheiten im Vergleich zum Ausgangsmaterial. Bei der Polyacrylamidgelelektrophorese in reduziertem und nicht-reduziertem Gel zeigte das Protein eine Hauptbande und mehrere Nebenbanden mit relativen Molekulargewichten von 62000 bzw. 61000 und 59000. Isoelektrische Fokussierung in Polyacrylamidgel ergab einen isoelektrischen Punkt zwischen 10,2 und 10,8. Im Agardiffusionstest zeigte sich eine Bande gegen Anti-Ganzzellen-Kaninchenserum. Die Aminosäureanalyse des fibrinogenbindenden Proteins wies Glycin, Glutaminsäure, Lysin, Alanin, Asparaginsäure und Arginin als Hauptbestandteile aus. Aus dem homologen Stamm isoliertes Protein A oder Teichonsäure zeigten bei der Prüfung durch Hämagglutination und Anti-Fibrinogen-Bindungsaktivität von Anti-Ganzzellen-Fab keine Fibrinogen-Bindungsaktivität. Die Menge des fibrinogenbindenden Proteins zur Absorption der Aktivität von Anti-Ganzzellen-Fab war auf 1/60 der des Ausgangsmaterials vermindert. Mit dem fibrinogenbindenen Protein beschichtete Schafery-throzyten agglutinierten in einer 0,001%igen (Gew./Vol.) Fibrinogenlösung.