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A comparison of various measures of sensitivity of M. tuberculosis to pyrazinamide

1970; Churchill Livingstone; Volume: 51; Issue: 4 Linguagem: Inglês

10.1016/0041-3879(70)90003-6

1878-6006

Srikanth Tripathy, D A Mitchison, Nitin Nair, S. Radhakrishna, S. Subbammal,

Pneumocystis jirovecii pneumonia detection and treatment

A test, employing Löwenstein-Jensen medium acidified with hydrochloric acid to a preinspissation pH of 4·80-4·85, is described for determining the sensitivity to pyrazinamide of strains of M. tuberculosis. The test was performed on cultures from patients with no history of previous chemotherapy with pyrazinamide, and on cultures from patients receiving daily treatment with pyrazinamide. Sensitivity was measured in terms of the minimal inhibitory concentration of the drug for various sizes of the inoculum, and as proportions of the bacterial population resistant to various concentrations of the drug. For each of these measures, the findings in patients with no history of previous chemotherapy with pyrazinamide were compared with those obtained at 4–12 months after the start of daily treatment with pyrazinamide; the definition of resistance was then chosen such that (a) it discriminated efficiently between the two populations, and (b) it classified only a small proportion of the former population as resistant. Four definitions of resistance were chosen — a minimal inhibitory concentration of 200 μg/ml. or more employing an inoculum containing approximately 0–4 mg. (moist weight) of bacilli per ml. and a 10-colony end-point, and proportions of 20% or more on 25 μg/ml., 5% or more on 50 μg/ml., and 1% or more on 100 μg/ml. The efficiency of the four definitions was of the same order. Further, highly satisfactory agreement was obtained between pairs of definitions in the classification of individual cultures as sensitive or resistant. High viable counts on the drug-free acidified medium were associated with high minimal inhibitory concentrations but had little effect on the proportions resistant. Wild strains with consistent resistance to pyrazinamide were rare. Finally, in patients with an unfavourable response to a daily regimen containing pyrazinamide, resistance had usually emerged four to six months after the start of treatment. Les auteurs décrivent un test de détermination de la sensibilite an pyrazinamide de souches de M. tuberculosis, en utilisant le milieu de Loewenstein-Jensen acidifie par l'acide chlorhydrique de façon à obtenir un pH de 4,80 – 4,85, avant coagulation. Les tests ont été faits à partir de cultures de malades n'ayant jamais reçu préalablement de pyrazinamide et avec des cultures de malades recevant un treaement quotidien par le pyrazinamide. La sensibilité a été mesureé en fonction de la concentration inhibitrice minimale pour divers inocula, et en fonction de la proportion de bacilles résistants à des concentrations variables de la drogue. Pour chacun de ces tests, les résultats trouvés chez les malades n'ayant jamais reçu de pyrazinamide ont été compares aux résultats obtenus 4 à 12 mois après le début d'un traitement quotidien par le pyrazinamide; la definition de la résistance a alors été déterminée de façon à ce que: (a) la discrimination entre les deux types de population soit nette; (b) cette classification fasse apparaitre seulement une petite proportion de souches résistantes avant traitement. Quatre définitions de la résistance ont été choisies — une concentration inhibitrice minimale de 200 mcg ou plus, avec un inoculum d'approximativement 0,4 mg de bacilles par ml (poids humide) avec un compte minimum de 10 colonies, ainsi que des proportions de 20% ou plus sur 25 mcg/ml, 5% ou plus sur 50 mcg/ml et 1% ou plus sur 100 mcg/ml. Les quatre définitions ont donné des résultats du même ordre. De plus, quand il s'est agit de classer individuellement chaque culture comme sensible ou résistance une concordance trés satisfaisante est apparue pour chaque paire de définitions. Des comptes bas d'unités viables sur les témoins acidifiés donnérent des concentrations inhibitrices minimales faibles, mais changérent peu la proportion de bacilles résistants. Les souches sauvages présentant une résistance nette au pyrazinamide ont été rares. Enfin, chez les malades ayant répondu défavorablement au traitement quotidien avec pyrazinamide, la résistance est habituellement apparue entre le quatrième et le sixième mois après le début de traitement. Se describe un método para determinar la sensibilidad del M. tuberculosis a lapirazinamida, en medio de Löwenstein Jensen acidificado con ácido hidroclórico y Ilevado a un pH de 4,80-4,85.E1 test se efectuó con cultivo de pacientes que no habían recibido pirazinamida previamenteby con cultivos de pacientes tratados con pirazinamida diariamente. Se midió la sensibilidad en términos de concentración mínima inhibitoria de la droga para diferntes inóculos y por las proporciones de población bacteriana resistentes a varias concentraciones de la droga. Para cada una de estas medidas se compararon los hallasgos en los pacientes sin tratamiento con los de aquellos que recibían la droga diariamente durante 4–12 meses. La difinición de resistencia fué tal que, a) estableció la eficacia entre las dos poblaciones bacterianas, y b) clasificó solamente una pequefia proporción de la población bacilar como resistente. Se eligieron 4 definiciones de resistencia, una concentración minima inhibitoria de 200ug/ml ó más empleando un inóculo que contiene alrededor de 0,4 mg (peso h6medo) de bacilos por ml. y 10 colonias, y proporciones de 20% ó más en 25 ug/ml., 5% ó más en 50 ug/ml y 1% ó más en 100 ug/ml. La eficacia de las 4 definiciones fué analóga. Además, bubo coincidencia entre pares de definiciones en la clasificación de cultivos individuales sensibles o resistentes. Un conteo bajo en el medio acificado sin droga dió concentraciones inhibitorias mínimas bajas pero tuvo poco efecto en la proporción de resistentes. Fueron raras las cepas salvajes resistentes a la pirazinamida. Finalmente, en pacientes con respuesta desfavorable a un regimen con pirazinamida diaria, la resistencia apareció cuatro a seis meses después de iniciado el tratamiento. Ein Test unter Verwendung eines Lowenstein-Jensen-Nährbodens wird beschrieben, wober vor dem Eindicken mit Salzsäure auf einen pH von 4,80-4,85 angesauert wird, um die Empfindlichkeit von M. tuberculosis — Stämmen gegen Pyrazinamid zu bestimmen. Genommen wurden die Kulturen von Patienten ohne voausgegangene Chemotherapie mit Pyrazinamid, außerdem von solchen Patienten, die täglich mit Pyrazinamid behandelt wurden. Die Empfindlichkeit wird ausgedrückt in Relation zur minimalen Hemmkonzentration des Präparats bei verschiedener Größe des Inokulums, Bowie als Proportion der resistenten Bakterienpopulation, die gegen verschiedene Konzentrationen ermittelt wurden. Mit jedem dieser Verfahren werden die Ergebnisse bei bisher nicht mit Pyrazinamid behandelten Patienten verglichen mit denen von Patienten mit täglicher Pyrazinamidbehandlung über 4–12 Monate. Die Resistenz wurde so definiert, daß 1. eine geniigend scharfe Unterscheidung zwischen zwei Populationen von Erregern möglich ist, 2. nur ein kleiner Teil der Ausgangsgruppe als resistent beurteilt werden mußte. So wurden vier verschiedene Resistenzdefinitionen gewahlt: eine minimale Hemmkonzentration von 200 μg/ml oder mehr bei Verwendung eines Inokulums von etwa 0,4 mg Feuchtgewicht der Bakterien pro ml und einem 10-Kolonien-Endpunkt, sowie Proportionen von 20% and mehr bei 25 μg/ml, 5% and mehr bei 50 μg/ml and 1% und mehr bei 100 μg/ml. Alle vier Definitionen erwiesen sich als gleich gut brauchbar. Darüberhinaus ergab sich höchst befriedigende Übereinstimmung zwischen Paaren von Definitionen bei der Klassifikation von Einzelkulturen als empfindlich oder resistent. Niedrige Zahlen von lebenden Erregern auf dem medikamentfreien Teil des angesäuerten Nährbodens gingen mit niedrigen minimalen Hemmkonzentrationen einher, hatten aber nur geringen Einfluß auf die Resistenz-Proportion. Wildstämme mit beständiger Resistenz gegen Pyrazinamid waren selten. Bei Patienten, die auf tägliche Pyrazinamidbehandlung nicht günstig ansprachen, entwickelte sich Resistenz vier bis sechs Monate nach Behandlungsbeginn.