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CHARACTERIZATION OF POLYPHENOL OXIDASE OF SOURSOP ( Annona muricata L.) FRUIT AND A COMPARATIVE STUDY OF ITS INHIBITION IN ENZYME EXTRACT AND IN PULP CARACTERIZACIÓN DE POLIFENOLOXIDASA DE FRUTOS DE GUANÁBANA ( Annona muricata L. ) Y ESTUDIO COMPARATIVO DE SU INHIBICIÓN EN EXTRACTOS DE ENZIMA Y EN PULPA CARACTERIZACIÓN DE POLIFENOLOXIDASA DE FROITOS DE GUANÁBANA ( Annona muricata L. ) E ESTUDIO COMPARATIVO DA SÚA INHIBICIÓN EN EXTRACTOS DE ENZIMA E EN PULPA

2004; Taylor & Francis; Volume: 4; Issue: 4 Linguagem: Espanhol

10.1080/11358120409487770

1696-2443

Pushkar Singh Bora, Heinz Johann Holschuh, Margarida Angélica da Silva Vasconcelos,

Phytochemicals and Antioxidant Activities

Abstract Resumen Resumo Crude enzyme extract containing polyphenoloxidase (PPO) was obtained from ripe soursop (Annona muricata L.) fruit by extraction with 0.2 M phosphate buffer (pH 7.5) containing 0.5 M NaCl, followed by precipitation with 20, 40, 60 and 80% saturation of ammonium sulfate and dialysis against distilled water at 4°C. The maximum PPO activity was observed in the protein fraction obtained with 60% ammonium sulphate saturation. The effect of pH (3 to 8.8), temperature (20 to 60°C) and chemical inhibitors (ascorbic acid, EDTA and SO2) at several concentrations on the PPO activity was studied. The optimum pH and temperature for PPO activity were 7.5 and 32°C, respectively. Among chemical inhibitors, ascorbic acid and SO2 were almost equally effective, but EDTA showed very small inhibitory effect. 61.9 and 71.5% inhibition of PPO was achieved using 0.28 mM and 0.84 mM concentrations of ascorbic acid, while for 55.4 and 70.2% inhibition 0.78 mM and 2.34 mM concentrations of SO2 were needed. Heating the enzyme extract at 70, 80, 90 and 95°C for 6 s reduced 15.2, 49.5, 84.8 and 95.1% PPO activity, respectively. At the natural pH of pulp (4.3), SO2 at concentration of 3.9 mM reduced specific activity of PPO from about 60 to about 8.4 U/mg protein in partially-purified enzyme extract (PPEE), while the specific activity of 22.5 U/mg protein was retained in the pulp. Heating PPEE at 80°C at pH 4.3 (natural pH of pulp) for about 14 s decreased specific enzyme activity from 60.0 to about 11.0 U/mg and heating during 8 min decreased to 9.0 U/mg protein. © 2004 Altaga. All rights reserved. Se obtuvo un extracto crudo de enzima conteniendo polifenoloxidasas (PPO) de frutos maduros de Guanábana (Annona muricata L.) por extracción con 0,2 M tampón fosfato (pH 7,5) conteniendo 0,5 M NaCl, seguido de precipitación con 20, 40, 60 y 80% de saturación de sulfato amónico y diálisis con agua destilada a 4°C. El máximo de actividad de PPO se observó en la fracción de proteína obtenida con 60% de saturación sulfato amónico. Se estudió el efecto del pH (3 a 8,8), temperatura (20 a 60°C) y inhibidores químicos (ácido ascórbico, EDTA y SO2) a varias concentraciones, sobre la actividad de PPO. Los óptimos de pH y temperatura para la actividad de PPO fueron 7,5 y 32°C, respectivamente. Mientras que para los inhibidores químicos, ácido ascórbico y SO2 fueron casi igual de efectivos, pero EDTA mostró un bajo efecto inhibidor. Se obtuvo un 61,9 y 71,5% de inhibición de PPO con 0,28 mM y 0,84 mM de concentración de ácido ascórbico, mientras que con 0,78 mM y 2,34 mM de concentración de SO2 obtuvo un 55,4 y 70,2% de inhibición, respectivamente. Calentando el extracto enzimático a 70, 80, 90 y 95°C durante 6 s, se redujo a 15,2, 49,5, 84,8 y 95,1% la actividad de PPO, respectivamente. Al pH natural de la pulpa (4,3), SO2 a la concentración del extracto enzimático 3,9 mM redujo la actividad específica de PPO desde 60 a 8,4 U/mg proteína en extracto enzimático parcialmente purificado (PPEE), mientras que en la pulpa la actividad específica se retuvieron 22,5 U/mg de proteína. Calentando PPEE a 80°C a pH 4,3 (ph natural de la pulpa) por 14 s se redujo la actividad enzimática específica de 60,0 a 11,0 U/mg y calentando 8 min a 9,0 U/mg de proteina.© 2004 Altaga. Todos los derechos reservados. Palabras clave: Guanábana, Annona muricata, Polifenoxidasa, Inhibición enzimática Obtívose un extracto cru de enzima contendo polifenoloxidasas (PPO) de froitos maduros de Guanábana (Annona muricata L.) por extracción con 0,2 M tampón fosfato (pH 7,5) contendo 0,5 M NaCl, seguido de precipitación con 20, 40, 60 y 80% de saturación de sulfato amónico e diálise con auga destilada a 4°C. O máximo de actividade de PPO observouse na fracción de proteína obtida con 60% de saturación sulfato amónico. Estudiouse o efecto do pH (3 a 8,8), temperatura (20 a 60°C) e inhibidores químicos (ácido ascórbico, EDTA e SO2) a varias concentracións, sobre a actividade de PPO. Os óptimos de pH e temperatura para a actividade de PPO foron 7,5 e 32°C, respectivamente. Mentras que para os inhibidores químicos, ácido ascórbico y SO2 foron case igual de efectivos, pero EDTA mostrou un baixo efecto inhibidor. Obtívose un 61,9 e 71,5% de inhibición de PPO con 0,28 mM e 0,84 mM de concentración de ácido ascórbico, mentras que con 0,78 mM e 2,34 mM de concentración de SO2 se obtivo un 55,4 e 70,2% de inhibición, respectivamente. Quentando o extracto enzimático a 70, 80, 90 e 95°C durante 6 s, reduciuse a 15,2, 49,5, 84,8 e 95,1% a actividade de PPO, respectivamente. O pH natural da pulpa (4,3), SO2 á concentración do extracto enzimático 3,9 mM reduciu a actividade específica de PPO dende 60 a 8,4 U/mg de proteína en extracto enzimático parcialmente purificado (PPEE), mentras que na polpa a actividade específica retivéronse 22,5 U/mg de proteína. Quentando PPEE a 80°C a pH 4,3 (pH natural de la polpa) por 14 s reduciuse a actividade enzimática específica de 60,0 a 11,0 U/mg e quentando 8 min a 9,0 U/mg de proteina. © 2004 Altaga. Tódolos dereitos reservados. Palabras chave: Guanábana, Annona muricata, Polifenoloxidasa, Inhibición enzimática