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Medición de respuesta inmune humoral y celular frente a antígenos de Brucella abortus RB51 en bovinos

1998; Austral University of Chile; Volume: 30; Issue: 2 Linguagem: Espanhol

10.4067/s0301-732x1998000200011

0717-6201

Ng S, Ong L, Chong P.P., Arturo Ortega, Álvaro Puentes, M.I. Gallego M., Olga C. Mariño J.,

Monoclonal and Polyclonal Antibodies Research

Con el objeto de evaluar comparativamente el tipo de respuesta inmune inducido por los antigenos estructurales purificados y vacunas vivas de Brucella abortus, 14 bovinos criollos hembras de 19 meses de edad fueron distribuidos al azar, en cinco grupos experimentales e inmunizados via subcutanea de la siguiente manera: OMP-II (proteinas de membrana externa), OMP-II-Cadena-O, OMP II acoplado a polisacarido-O, B. abortus cepa RB51, B. abortus cepa 19 (C19) y solucion salina para el grupo control. Dos meses posinmunizacion, los animales fueron desafiados, via intramuscular, con cepa patogena de referencia B. abortus 2308 y evaluados en su nivel de proteccion 30 dias posdesafio. La respuesta inmune humoral especifica fue determinada mediante las pruebas convencionales, de aglutinacion Rosa de Bengala, fijacion de complemento, inmunodifusion radial, ELISA indirecta, a los 8, 15, 30, 60 y 90 dias posinmunizacion. Adicionalmente se determino la subclase de IgG por ELISA tipo doble sandwich. La evaluacion de respuesta celular fue determinada mediante linfoproliferacion, expresada en indices de estimulacion (IS), obtenidos por los niveles de incorporacion de 3H timidina, medicion de Interferon gamma (IFN-g), igualmente expresado como IS y cuantificacion de subpoblaciones linfoides CD4+ y CD8+ por citofluorometria. Animales vacunados con cepas vivas demostraron proteccion total al reto, mientras se observo un 66% de proteccion en los vacunados con antigenos purificados. Se observo ausencia de anticuerpos a lipopolisacarido, sLPS, por las pruebas convencionales para B. abortus en todos los grupos inmunizados, excepto el vacunado con cepa 19, confirmando la ventaja diagnostica de la utilizacion de la cepa RB51 o sus antigenos purificados. La linfoproliferacion como una de las medidas de respuesta celular no demostro IS significativos (p0.05) frente a los antigenos estructurales purificados, OMP-II, Cadena-O y sLPS en ninguno de los grupos experimentales. IS superiores se encontraron al emplear antigeno soluble crudo de B. abortus RB51, los cuales evidenciaron diferencias significativas (p<0.05) a favor de los grupos vacunados con los antigenos replicantes. Con respecto a los grupos experimentales se confirmaron niveles de produccion de IFN-g mas altos en los grupos vacunados con cepas vivas, especialmente en el grupo cepa 19. Al analizar la relacion CD4/CD8, esta se mantuvo estable durante todo el tiempo de observacion y no se detecto predominio ni disminucion de ninguna subpoblacion linfoide. Los resultados anteriores, unidos al nivel de proteccion a descarga encontrado favorable a las cepas vivas, permiten, a su vez, concluir que la cepa B. abortus RB51 induce igual nivel de proteccion al de la cepa de vacuna tradicional C19, superando la limitante en diagnostico diferencial. Los antigenos purificados de membrana externa, OMP-II y OMP-II-Cadena O, aunque presentan un nivel inferior de proteccion, en los parametros inmunologicos medidos en este estudio, en general, se comportan en forma semejante a las cepas vivas, indicando que son antigenicos e inducen una memoria de corta duracion probablemente necesitando administracion de dosis repetidas para alcanzar niveles eficientes de proteccion. Se plantea que la proteccion observada en los animales vacunados con B. abortus RB51 ante desafio patogeno es el resultado de la estimulacion de linfocitos T CD4+ Th1 y linfocitos T CD8+ ante la presentacion de peptidos de proteinas de membrana externa.