Gerichtete Evolution eines enantioselektiven Enzyms durch kombinatorische multiple Kassetten-Mutagenese
2001; Wiley; Volume: 113; Issue: 19 Linguagem: Alemão
10.1002/1521-3757(20011001)113
ISSN1521-3757
AutoresManfred T. Reetz, Stephanie Wilensek, Dongxing Zha, Karl‐Erich Jaeger,
Tópico(s)Chemical Synthesis and Analysis
ResumoRekombinante Methoden sind bei der gerichteten Evolution von enantioselektiven Enzymen bestens geeignet. Für die kinetische Racematspaltung des Esters rac-1 durch eine Lipase [Gl. (a)] wurde in drei Schritten aus weniger als 40 000 Enzymvarianten eine gefunden, die die Reaktion mit fast 50-mal höherer Enantioselektivität katalysiert als das Wildtyp-Enzym (1. Erzeugung von Mutanten mittels fehlerhafter Polymerasekettenreaktion (epPCR), 2. Identifizierung von „hot regions“ und „hot spots“ durch epPCR und vereinfachte kombinatorische multiple Kassetten-Mutagenese (CMCM) und 3. Erweiterung des CMCM-Verfahrens, um eine definierte Region im Proteinsequenzraum abzudecken).
Referência(s)