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Development of a lavage procedure to collect lung secretions from chickens for evaluating respiratory humoral immunity

2005; Taylor & Francis; Volume: 34; Issue: 5 Linguagem: Francês

10.1080/03079450500268476

1465-3338

Peter S. Holt, H. D. Stone, R.W. Moore, Richard K. Gast,

Bacteriophages and microbial interactions

Mucosal immunology research has been hampered by the difficulty and labour-intensiveness of collecting samples. This is especially true for sites such as the lung, and the present paper describes a simple method for obtaining samples from this organ in chickens. Following sacrifice, the bird was placed on its back and the trachea was cut and exteriorized. Narrow-diameter tubing, to which a 30 ml syringe was attached, was threaded down the trachea to the bronchi and air was evacuated from the lung. Warm buffer was administered and the lung sample then aspirated, processed and frozen. In the current experiment this sampling system was tested on hens that were challenged with Salmonella Enteritidis. Elevated anti-Salmonella Enteritidis antibody levels in lung from infected hens were observed in significantly more infected hens than non-infected control hens in two trials. The simplicity and utility of this sampling system will make it a useful tool for those laboratories wishing to expand their humoral mucosal immunology capabilities, even for study of non-respiratory pathogens. Développement d'une procédure de lavage pour récolter les secrétions pulmonaires des poulets permettant d'évaluer l'immunité humorale respiratoire Les recherches sur l'immunologie muqueuse ont été freinées par la difficulté et la lourdeur du travail de récolte des échantillons. C'est principalement vrai pour certains organes tels les poumons et le présent article décrit une méthode simple pour obtenir des échantillons à partir de cet organe chez le poulet. Après euthanasie, l'animal est placé sur le dos et la trachée est coupée et extériorisée. Un tuyau de faible diamètre, auquel une seringue de 30 ml est attachée, est enfilé dans la trachée jusqu'aux bronches et l'air est évacué des poumons. Un tampon chaud est administré et les échantillons de poumons sont aspirés, traités et congelés. Cette méthode d'échantillonnage a été testée chez des pondeuses qui ont été éprouvées avec Salmonella Enteritidis (SE). Des niveaux élevés d'anticorps anti SE dans les poumons des pondeuses infectées ont été observés chez significativement plus de poules infectées que chez les témoins non infectés, dans deux essais. La simplicité et l'utilité de cette méthode d'échantillonnage en feront un outil utile pour les laboratoires désirant étendre leurs capacités en immunologie humorale muqueuse, voire même pour des études d'agents pathogènes non respiratoires. Entwicklung einer Spültechnik zur Gewinnung von Lungensekret aus Hühnern für die Untersuchung der humoralen Immunität im Respirationstrakt Die Untersuchung der Schleimhautimmunität ist bislang durch die Schwierigkeit und Arbeitsintensivität der Probenentnahmen erschwert worden. Dies galt insbesondere für ein Organsystem wie die Lunge. Die vorliegende Studie beschreibt eine einfache Methode zur Probengewinnung aus diesem Organ bei Hühnern. Unmittelbar nach der Tötung wurde das Tier auf den Rücken gelegt und die Trachea durchtrennt und vorgelagert. Ein Tubus mit engem Durchmesser, auf den eine 30-ml-Spritze aufgesetzt war, wurde in die Trachea bis zu den Bronchien eingeführt und die Luft aus der Lunge evakuiert. Anschließend wurde warme Pufferlösung eingegeben und dann die Lungenspülprobe aspiriert, bearbeitet und tiefgefroren. In dem beschriebenen Experiment wurde diese Spülmethode an Hennen getestet, die mit Salmonella Enteritidis (SE) infiziert worden waren. In zwei Versuchen wurden in den Lungen erhöhte Anti-SE-Antikörpertiter bei signifikant mehr infizierten als nicht infizierten Kontrollhennen festgestellt. Die Einfachheit und Anwendbarkeit dieser Probenentnahmemethode macht sie zu einem nützlichen Werkzeug für die Laboratorien, die ihre Fähigkeiten auf dem Gebiet der humoralen Schleimhautimmunologie auch für die Untersuchung nicht-respiratorischer Erreger erweitern möchten. Desarrollo de un procedimiento de lavado para recoger secreciones pulmonares en pollos para evaluar la inmunidad humoral respiratoria La investigación en la inmunidad de mucosas ha encontrado dificultades debido al hecho que la recolección de muestras es laboriosa. Esto es especialmente cierto para muestras como el pulmón y el presente trabajo describe un método simple para obtener muestras de este órgano en pollos. Tras el sacrificio, el ave se colocaba sobre la espalda y se cortaba y exteriorizaba la tráquea. Se intubaba mediante un tubo de diámetro estrecho al cual se insertó una jeringa de 30 ml, y se colocaba por la tráquea, hasta los bronquios, para evacuar el aire de los pulmones. Una solución tampón caliente era administrada a la muestra de pulmón y después era aspirada, procesada y congelada. En el presente experimento, este tipo de muestreo fue utilizado para testar gallinas que habían sido inoculadas con Salmonella Enteritidis (SE). Se detectaron niveles elevados de anticuerpos anti-SE en pulmones de gallinas y las diferencias de estos anticuerpos en gallinas infectadas y no infectadas fueron significativas en dos experimentos. La simplicidad y la utilidad de este sistema de muestreo lo hará una herramienta útil para aquellos laboratorios a los cuales les interese expandir su capacidad para el estudio de la inmunidad humoral de mucosas, incluso para el estudio de patógenos no respiratorios.