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Die verwendung von 2,4,6-trinitrobenzolsulfonsäure zum aminosäurennachweis in automatischen aminosäurenanalysatoren

1968; Elsevier BV; Volume: 32; Linguagem: Alemão

10.1016/s0021-9673(01)80491-x

1873-3778

J. Harmeyer, H.‐P. Sallmann, L. Ayoub,

Mass Spectrometry Techniques and Applications

Es wird eine Methode beschrieben zum Nachweis von Aminosäuren mit 2,4,6-Trinitrobenzolsulfonsäure (TNBS). Unter Beibehaltung des im Analysator für den Ninhydrinnachweis vorliegenden Analysenschemas kann dieses Nachweisreagenz statt Ninhydrin wahlweise in automatisch arbeitenden Aminosäurenanalysatoren verwendet werden. Es muss lediglich die Möglichkeit zur Messung der Extinktion bei 350 nm bestehen. TNBS wird den Elutionspuffern bis zu einer Konzentration von 60 mg/100 ml zugesetzt. Statt Ninhydrinreagenz wird dem Eluat als Reagenzpuffer 10%ige Na2CO3-Lösung (wasserfrei) + 1.4 ml 6 N NaOH/100 ml Lösung im Verhältnis 1 + 2 zugemischt. Die Reaktion zwischen Aminosäuren und TNBS läuft bei Zimmertemperatur un pH 9.2–9.3 in etwa 10–20 Min. ab. Der Aminosäurennachweis mit TNBS erwies sich als halb so empfindlich wie mit Ninhydrin. Dei Streuung der Analysenwerte lag um 3–7% niedriger als beim Nachweis mit Ninhydrin. Zur Bestimmung optimaler Reaktionsbedingungen im Rahmen dieser Methode wurde der Einfluss verschiedener Puffer, des pH-Wertes organischer Lösungsmittel, der TNBS- und Aminosäurenkonzentration getestet. Die für diese Methode erforderlichen Reagentien sind über 2–4 Wochen haltbar. 2,4,6-Trinitrobenzenesulphonic acid (TNBS) can be used for the quantitative determination of amino acids in automatic amino acid analyzer. If light absorption can be measured at 350 nm, TNBS can be used without further technical modifications instead of ninhydrin. TNBS is added to the elution buffers (60 mg/100 ml buffer). The ninhydrin reagent is replaced by a 10% Na2CO3 (anhydrous) solution + 1.4 ml of 6 N NaOH per 100 ml of solution which is continuously added to the elution buffer in a ration of 1:2. The reaction between amino acids and TNBS takes place in the teflon coil at room temperature at pH 9.2–9.3 within 10–20 min. The sensitivity of the method was about 50% of that of ninhydrin. The reproducibility of the measurement was significantly better. For optimum conditions the influence of various buffers, of pH values, of various added organic solvents, and of the TNBS and amino acid concentrations was tested. The reagents for the measurements are stable for about 2–4 weeks.