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Untersuchungen über die Toxoplasmose beim Huhn unter besonderer Berücksichtigung der Serodiagnostik

2010; Wiley; Volume: 2; Issue: 3 Linguagem: Inglês

10.1111/j.1439-0442.1955.tb00070.x

0044-4294

H. Geißler,

Rabies epidemiology and control

Zusammenfassung 1 Die Einleitung gibt an Hand des Schrifttums eine eingehende Übersicht über die Toxoplasmose bei Tieren. 2 Die eigenen Untersuchungen erstreckten sich auf Prüfung der Beweglichkeit der Toxoplasmen insbesondere auf die Darstellung von Geißeln, das Eindringen der Toxoplasmen in Erythrozyten, die Widerstandsfähigkeit der Toxoplasmen gegenüber äußeren Einflüssen, die Reingewinnung der Toxoplasmen, die Herstellung eines spezifisch wirksamen Antigens, die Durchführung der Komplementbindungsreaktion, die Infektiosität der Toxoplasmen für Hühner und die Übertragung der Toxoplasmen über das Ei auf Küken. 3 Die Untersuchungen wurden mit 2 Toxoplasmenstämmen durchge-führt. Die Fortzüchtung der Toxoplasmen geschah in weißten Mäusen, die in der Regel 2 Tage nach der Infektion erkrankten und zwischen dem 3. und 5. Tag verendeten. Zur Verwendung kam das toxoplasmenhaltige Peritoneal-exsudat. Von der Züchtung auf der Chorio-Allantois des bebrüteten Hühner-eis wurde nur gelegentlich Gebrauch gemacht. Die Versuche, die Toxoplasmen auf künstlichen Protozoennährböden zu züchten, führten zu keinem Ergebnis. Für die Färbung der Toxoplasmen waren die Färbeverfahren nach Giemsa und nach Kiewit de Jonge am besten geeignet. Durch die von Piekarski empfohlene Behandlung der Ausstrichpräparate vor der Giemsa-Färbung mit Salzsäure wurde die Kernstruktur besonders gut sichtbar. Der Nachweis der Toxoplasmose-Antikörper geschah mittels der Sero-Farb-Reaktion und der Komplementbindungsreaktion, die in der üblichen Ausführung sowie auch in der Modifikation nach Westphal zur Anwendung gelangte. 4 Die widersprechenden Angaben über das Vorliegen von Geißeln bei Toxoplasmen waren der Anlaß vielseitiger morphologischer Untersuchungen. Geißeln konnten in keinem Fall nachgewiesen werden. Die Toxoplasmen sind aber trotzdem befähigt, aktiv in die Zellen einzudringen, und zwar nicht nur in Körperzellen, sondern auch in rote Blutkörperchen. Das Eindringen in einen Hühnererythrozyten bei einem Hühnerembryo ist in einer dem Text beigefügten Abbildung mikrophotographisch festgehalten. 5 Die Lebensfähigkeit der Toxoplasmen in physiologischer Kochsalzlösung und Tyrodelösung betrug bei Zimmertemperatur 12 Tage, bei +4° C 14 Tage. In Leber-, Milz- und Herzgewebe blieben sie 2 Tage, in Gehirngewebe 7 Tage am Leben. Bei −18°C eingefroren waren sie schon nach 24 Stunden abgestorben. Die Lebensfähigkeit der Toxoplasmen scheint demnach weniger von der Aufbewahrungstemperatur, als von den sie umschließenden Medien abhängig zu sein. 6 Um für die Komplementbindungsreaktion ein spezifisch hochwirk-sames Antigen zu gewinnen, das frei von dem Wirtskörper herstammenden Zellen und sonstigen Beimengungen ist, wurden Versuche zur Trennung der Toxoplasmen von den angeführten Fremdbestandteilen unternommen. Diese führten zum Ergebnis, daß unter Zugrundelegung der Größe und des spezifischen Gewichtes der Toxoplasmen und einzelner Körperzellen eine Reingewinnung der Toxoplasmen möglich ist. 7 Extrakte, die aus reinen Toxoplasmen mit dem 6000fachen Volumen Phenol-Kochsalzlösung durch Schütteln gewonnen wurden, ergaben Antigene, die in der Komplementbindung immer den gleichen Wert aufwiesen. Diese Antigenlösungen entsprachen in ihrer antigenen Wirksamkeit denjenigen Westphals oder waren dieser überlegen. 8 Eine Infektion der Hühner mit Toxoplasmen war intraperitoneal, peroral und kloakal möglich. Der letzte Infektionsweg, der experimentell erstmalig nachgewiesen wurde, dürfte auch unter natürlichen Verhältnissen vorkommen. Eine Übertragung der Toxoplasmen vom Huhn über das Ei auf Küken wurde festgestellt. 9 Der direkte Nachweis der Toxoplasmen im Untersuchungsmaterial gelingt nur selten, häufiger gelingt er mittels des Mäuseimpfversuches. Falls die mit dem Ausgangsmaterial geimpften Mäuse nicht starben, ist es notwendig, nach 8 Wartetagen eine zweite evtl. auch noch nach weiteren 8 Tagen eine 3. Passage durchzuführen, die dann beim Vorliegen der Toxoplasmen zum Absterben der Mäuse führt. Von den serologischen Reaktionen ist der Komplementbindungsreaktion vor der Sero-Farb-Reaktion der Vorrang zu geben. Summary Studies on Toxoplasmosis in the hen with special reference to serological diagnosis 1 The introduction reviews the literature relating to toxoplasmosis in animals. 2 Experiments are described which deal with the motility of Toxoplasma and the demonstration of flagella, the penetration of erythrocytes by Toxoplasma, resistance outside the body, purification of the organism, preparation of a specific antigen, technique of complement fixation tests, infectivity for hens, and transmission to chicks through the hen. 3 The experiments were conducted with two different strains. The organism was cultured in white mice which usually became ill on the second day and died between the third and fifth days. The peritoneal exudate was used as the source of Toxoplasma. Cultivation on the chorio-allantois of the developing egg was only occasionally used. Attempts to grow the organism on artificial media as used for other protozoa were unsuccessful. The most suitable staining methods were those of Giemsa and Kiewit de Jonge. Nuclear structure was demonstrated particularly well by treating films with hydrochloric acid before staining by Giemsa as recommended by Piekarski. Antibodies were demonstrated by complement fixation tests carried out by the usual techniques as well as by the modified method of Westphal and also by the “serological staining reaction” described by Sabin and Feldman. 4 Despite the use of a variety of techniques no flagella could be demonstrated. Toxoplasma are however able actively to penetrate cells, not only tissue cells but also red blood corpuscles. Penetration of an erythrocyte in a chick embryo is illustrated in photographs. 5 Toxoplasma survived twelve days at room temperature in normal NaCl and Tyrode solution and fourteen days at 4°C. It was destroyed in twenty-four hours when frozen at −18°C. Its resistance seems to depend less on temperature than on the medium in which it is situated. 6 Attempts were made to separate Toxoplasma from associated foreign material in order to prepare a specific highly active antigen for complement fixation tests. This was possible by taking account of the size and specific gravity of Toxoplasma. 7 Extracts prepared by diluting pure Toxoplasma with 6,000 times their volume of carbol saline gave antigens which gave a constant titre in complement fixation tests and were as good as, or better than, those prepared by Westphal. 8 Hens could be infected by the peritoneal, oral and cloacal routes. The cloacal route, demonstrated experimentally for the first time, may also be of importance under natural conditions. Transmission from the hen to the chick through the egg was demonstrated. 9 Direct demonstration of Toxoplasma is rarely successful but more often succeeds by mouse inoculation. If the mice survive it is necessary to passage serially after eight days once or twice, when if toxoplasma are present the mice will die. The complement fixation test is preferable to the “serological staining test.” Résumé Recherches sur la toxoplasmose de la poule en tenant compte en particulier du diagnostic sérologique Les recherches personnelles de l'auteur sur les toxoplasmes embrassent l'étude de la motilité — notamment la mise en évidence de cils vibratiles —, leur pénétration dans les hématies, leur résistance envers les influences extérieures, le moyen de les obtenir à l'état pur, la préparation d'un antigène actif et spécifique, la réaction de fixation du complément, leur infectiosité pour la poule et la transmission au poulet par l'intermédiaire de l'oeuf. Les recherches furent effectuées avec 2 souches de toxoplasmes. On conserva ces souches par inoculation à des souris blanches qui devenaient malades en général 2 jours après l'injection et mouraient entre le 3eme et le 5eme jour. On employa pour ces passages l'exsudat péritonéal contenant les toxoplasmes. La culture sur l'allanto-chorion de l'oeuf de poule en incubation ne fut employée qu'occasionnellement. Les essais de culture des toxoplasmes sur des milieux artificiels employés pour les protozoaires ne donnérent aucun résultat. La mise en évidence des anticorps de la toxoplasmose fut faite par sérodiagnostic avec coloration (Sero-Farb-Reaktion) et au moyen de la réaction de déviation du complément, selon la méthode usuelle ou la modification proposée par Westphal. Les indications contradictoires sur l'existence de cils vibratiles chez les toxoplasmes furent l'occasion d'études morphologiques variées. Des cils ne purent jamais être observés. Les toxoplasmes possèdent tout de même la propriété de pénérer activement dans les cellules, aussi bien dans les hématies que dans les cellules des tissus. La durée de la vie des toxoplasmes dans le sérum physiologique et la liqueur de Tyrode était de 12 jours à la température ordinaire et de 14 jours à + 4°C. Dans le tissu du foie, de la rate et du coeur, ils restent vivants 2 jours et 7 jours dans la substance cérébrale. Congelés à −18°C, ils étaient morts déjà au bout de 24 heures. La durée de la vie des toxoplasmes semble done dépendre moins de la température à laquelle ils sont conservés que du milieu qui les entoure. Pour obtenir pour la réaction de fixation du complément un antigéne spécifique très actif et ne contenant aucune cellule du corps de l'hôte ou autre impureté, on essaya de séparer les toxoplasmes de tout élément étranger. Ces essais montrérent qu'il est possible d'obtenir des toxoplasmes à l'état pur en tenant compte de la grandeur et du poids spécifique des toxoplasmes et des différentes cellules du corps. Des extraits obtenus par agitation à partir de toxoplasmes à l'état pur dilués dans 6000 fois leur volume d'une solution de phénol et de chlorure de sodium, donnèrent des antigénes qui dans la réaction de déviation du complément avaient toujours la même valeur. Ces solutions antigénes correspondaient par leur efficacité à celles de Westphal ou leur étaient supérieures. L'infection des poules par les toxoplasmes a été possible en injection intra-péritonéale, par voie buccale, ou par le cloaque. Ce dernier mode d'in-fection, essayé ici pour la première fois, se produit sans doute également dans les conditions naturelles. La transmission des toxoplasmes de la poule aux poussins par l'intermédiare de l'oeuf fut constatée. La mise en éavidence des toxoplasmes par examen direct du matériel infecté ne réussit que rarement. Il est plus facile de déceler les toxoplasmes par l'essai de transmission à la souris. Si les souris inoculées par le matériel d'examen ne meurent pas, il est nécessaire, après 8 jours d'attente, de faire un second passage et le cas échént, un 3eme passage 8 jours plus tard. Si une toxoplasmose existe, elle entraîne alors la mort des souris. Parmi les réactions sérologiques, la préférence doit être donnée à la réaction de déviation du complément plutôt qu'à la séro-réaction avec coloration (Sero-farb-Reaktion). Resumen Investigaciones sobre la toxoplasmosis en la gallina, bajo la consideration especial del diagnóstico serológico Las investigaciones propias se extienden al análisis de la motilidad de los toxoplasmas, sobre todo a la representación de los flagelos, la penetración en los hematícs, la resistencia frente a las influencias externas, el aislamiento puro, la obtención del antígeno específicamente activo, la realización de la reacción de fijación del complemento, la infecciosidad para las gallinas y la transmisión por medio del huevo a los pollitos. Los estudios se realizaron con dos cepas de toxoplasmas. El cultivo se hizo en ratones blancos, que por regla general enfermaban 2 días después de la infección y morian entre el tercero y el quinto día. Se empleaba el exudado peritoneal rico en toxoplasmas. En muy contadas ocasiones se recurrió al cultivo en el corioalantoides del huevo embrionado de gallina. No condujeron a ningún resultado positivo los ensayos realizados para cultivar los toxoplasmas en medios nutritivos artificiales para protozoos. La identificación de los anticuerpos de la toxoplasmosis se logró mediante la reacción serológica coloreada y la reacción de fijacioAn del complemento, que se aplicaron tanto en la forma usual como también con la modificación según Westphal. Las referencias contradictorias sobre la presencia de flagelos en los toxoplasmas fueron motivo de múltiples investigaciones morfológicas. En ninguno de los casos se pudieron apreciar flagelos. Sin embargo, los toxoplasmas están capacitados para penetrar activamente en las células y no sólo en las hísticas, sino también en los hematíes. La vitalidad de los toxoplasmas en solución salina fisiológica y solución de Tyrode a temperaturas ambiente era de 12 dís, a + 4°C de 14 días. En los tejidos hepáticos, esplénicos y cardíacos permanecían 2 díss vivos, y en los tejidos cerebrales 7 días. Cuando se congelaban a −18°C, morían a las 24 horas. Por ello, parece que la capacidad vital de los toxoplasmas depende más de los medios que les rodean que de la temperatura de conservación. Con el fin de obtener para la reacción de fijación del complemento un antígeno específico muy activo, que estuviera libre de células procedentes del organismo huésped y demás impurezas, se realizaron experiencias para separar lo toxoplasmas de los citados componentes extraños. Estas condujeron al resultado, que es posible la obtención pura de los toxoplasmas si se toman por bas el tamaño y el peso específico de los toxoplasmas y de las distintas células orgánicas. Los extractos de protoplasmas puros, obtenidos mediante agitación en una solución salina fenolada 6000 veces mayor, dieron unos antígenos que tenían siempre el mismo valor en la reacción de fijación del complemento. Estas soluciones antigénicas correspondían en su actividad a las de Westphal o eran superiores a las mismas. La infección de las gallinas con toxoplasmas resultó posible por las vías intraperitoneal, peroral y cloacal. La vía de infección citada en último lugar, que aquí se ha comprobado experimentalmente por vez primera, también podría darse bajo las condiciones naturales. Se ha observado la transmisión de los toxoplasmas de la gallina al pollo a través del huevo. La identificación directa de lo toxoplasmas en el material de análisis no se logra más que en contadas ocasiones. Con mayor frecuencia, se consigue mediante la prueba de inoculación al ratón. Caso de que los ratones inoculados con el material problema no mueran, se impone un segundo pase después de 8 días de espera y, a veces, también después de otros 8 días un tercer pase, que en presencia de toxoplasmas conduce a la muerte de los ratones. De las reacciones serológicas, se le ha de conceder la primacía a la reacción de fijación del complemento antes de la reacción serológica coloreada.