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The effect of dithiothreitol on VLA-4 detection in peripheral blood and induced sputum cells

2002; Elsevier BV; Volume: 30; Issue: 4 Linguagem: Espanhol

10.1016/s0301-0546(02)79122-2

1578-1267

Javier Domínguez‐Ortega, Francisco León, Ana Alonso‐Llamazares, Elizabeth Roldán González, Teresa Robledo, Pablo Hernansanz‐Agustín, A. Bootello, C. Martínez‐Cócera,

Cystic Fibrosis Research Advances

Induced sputum has been shown to be a reliable technique for investigating airway inflammation non-invasively. Flow cytometry could provide useful information in this area. However, the viscosity of the sample entails the use of a mucolytic agent. Dithiothreitol (DDT) is the most frequently used agent although it could affect detection of different inflammatory markers To measure the effect of DDT on the detection of certain adhesion molecules in eosinophils and lymphocytes, sputum was induced from seven non-smoking asthmatic and non-asthmatic subjects treated with 0.1 M DDT. The samples were analyzed by flow cytometry. Whole blood samples from the same subjects were also processed with DTT and analyzed by flow cytometry Very late activated antigen-4 (VLA-4) levels on eosinophils in intracellular and surface staining were much lower than expected. VLA-4 on lymphocytes was also altered but less so than on eosinophils. VLA-4 levels were also decreased on blood cells after DTT treatment. No abnormalities were found in the detection of CD29 on eosinophils and the β7-chain in lymphocytes Flow cytometry could be used as a complementary method to induced sputum in the investigation of airway inflammation. However, DTT could interfere with the detection of some inflammatory markers, as is the case with VLA-4 El esputo inducido se ha mostrado como una técnica fiable para estudiar de un modo no invasivo, la inflamación de la vía respiratoria en el asma bronquial. La citometría de flujo puede aportar información útil en este campo. No obstante, la viscosidad de la muestra implica la utilización de un agente mucolítico, siendo el Ditiotreitol (DTT) uno de los más usados, a pesar de que puede alterar la expresión de diferentes mediadores inflamatorios Se indujo esputo de 7 sujetos asmáticos y no asmáticos, todos no fumadores. Se trataron las muestras con DTT 0.1M y se analizaron con citometría de flujo. Muestras de sangre de los mismos sujetos igualmente fueron procesadas con DTT 0.1M y analizadas Los niveles de detección de VLA-4 en la superficie y a nivel intracelular en los eosinófilos, fue más baja de lo esperado. La alteración de los niveles de VLA-4 en linfocitos fue menor que en los eosinófilos. En sangre, la detección de VLA-4 disminuyó en las muestras tratadas con DTT. No se observaron anormalidades en la detección de CD29 en eosinófilos ni en la cadena β7 en linfocitos La citometría de flujo puede ser usada en el estudio de la inflamación en la vía aérea aunque se debe tener en cuenta que el DTT altera la detección de algunos marcadores, como así se comprueba para el VLA-4