Portal de Periódicos da CAPES

Identification of Bovine Leukemia Virus (BLV) Infected Cattle by Complex-Trapping-Blocking (CTB) ELISA Employing Monoclonal Antibodies Directed Against BLV-p24

1987; Wiley; Volume: 34; Issue: 1-10 Linguagem: Alemão

10.1111/j.1439-0450.1987.tb00453.x

1439-0450

G. F. de Boer, H. M. Boerrigter, Harry J.M. Groen, Albert D. M. E. Osterhaus,

Viral Infectious Diseases and Gene Expression in Insects

Summary Six hybridoma cell lines have been established that secrete monoclonal antibodies (MCAs) directed against bovine leukemia virus (BLV) core protein p24. Various enzyme‐linked immunosorbent assays (ELISA) were tested for the applicability of these MCAs in BLV antibody detection. A highly sensitive IDAS‐ELISA that detects antibody against BLV‐p24 was developed, but non‐specific reactivity made this test unsuited for routine enzootic bovine leukosis (EBL) screening. Non‐specific reactivity was not observed in a Complex‐trapping‐blocking (CTB)‐ELISA in which MCA anti‐BLV‐p24‐coated plates were simultaneously incubated with undiluted serum and BLV antigen, followed by addition of another MCA anti‐BLV‐p24 labelled with horseradish peroxidase (HRP). The CTB‐ELISA‐p24 was not sensitive enough to screen milk samples. Test results obtained with sera, however, matched markedly well with those obtained in agar gel precipitation tests (AGPT) and in ELISAs detecting antibodies against BLV‐gp51. In sequentially collected serum samples from BLV‐infected calves, antibodies were demonstrated at about the same time by CTB‐ELISA‐p24 and AGPT‐gp51. Different routes and doses of BLV exposure caused major differences in the first appearance of antibodies. Zusammenfassung Identifizierung von Leukämievirus (BLV)‐infizierten Rindern durch Einsatz monoklonaler Antikörper gegen BLV‐p24 in einem “Complex‐trapping‐blocking (CTB)‐ELISA” Es wurden sechs Hybridoma‐Zell‐Linien entwickelt, die monoklonale Antikörper (MCA) gegen das Coreprotein p24 des bovinen Leukämievirus (BLV) sezernieren. Mehrere ELISA‐Testanordnungen zur Eignung dieser MCA für den BLV‐Antikörpernachweis wurden erprobt. Es wurde ein hochsensitiver IDAS‐ELISA entwickelt, der Antikörper gegen das Protein BLV‐p24 ermittelt, allerdings lassen unspezifische Reaktionen einen routinemäßigen Einsatz zum Screening der enzootischen bovinen Leukose nicht zu. In einem “Complex‐trapping‐blocking (CTB)‐ELISA” trat keine unspezifische Reaktion auf. Hierzu wurden die mit Anti‐BLV‐p24‐MCA‐beschichteten Platten gleichzeitig mit unverdünntem Serum und BLV‐Antigen inkubiert. Anschließend wurde ein anderer, Meerrettichperoxidase (HRP)‐konjugierter, Anti‐BLV‐p24‐MCA zugegeben. Der CTB‐ELISA war nicht empfindlich genug, um Milchproben zu testen. Testergebnisse jedoch, die an Untersuchungen von Seren erhalten werden, stimmten ausgesprochen gut mit solchen überein, die in der Agargel‐Präzipitation (AGPT) und in ELISA's ermittelt wurden, die Antikörper gegen das BLV‐gp51 nachweisen. In Serum‐Verlaufsuntersuchungen BLV‐infizierter Kälber, wurden Antikörper im CTB‐ELISA‐p24 und in der AGPT‐gp51 annähernd zur selben Zeit nachgewiesen. Unterschiedliche Applikationswege und Dosierungen des BLV hatten größere Abweichungen im erstmaligen Auftreten von Antikörpern zu Folge.