The enzymatic conversion of uric acid spectrophotometric analysis
1948; Elsevier BV; Volume: 2; Linguagem: Inglês
10.1016/0006-3002(48)90078-x
ISSN1878-2434
Autores Tópico(s)Metabolomics and Mass Spectrometry Studies
ResumoThe disappearance of the light absorption of uric acid in enzymatic experiments is generally not a true expression of the disappearance of uric acid. The spectral changes involved, show that at least two intermediate substances are transitorily accumulated, which cause a retardation of the disappearance of the absorption at the maximum wave-length and the occurrence of a transitory absorption at wave-lengths at which uric acid produces little or no absorption. The accumulation of the intermediate substances is very slight when borate ions are present and the pH not above 8. The reason for this is that the primary intermediate substance, which absorbs the long-waved and also the short-waved ultraviolet, is rapidly decomposed in the presence of borate. This decomposition is independent of the pH. The end products have only slight absorption and exclusively in the short-waved region. The disappearance of uric acid may therefore be followed, and the activity of uricase may be estimated, through observations of the disappearance of the absorption at the maximum wavelength of uric acid in systems with borate buffer of pH 8. The primary intermediate substance may be examined in the absence of borate and at a higher wave-length at which uric acid does not absorb. The secondary intermediate compound may be examined separately at shorter wave-lengths, when uric acid has disappeared, and when the primary substance has been excluded by the addition of borate. The absorption of the secondary substance is greater as the pH increases. Both the formation velocity and the decomposition velocity of the secondary substance is increased with an increasing pH. From a comparison of these results with the findings of Klemperer it seems probable, that the formation of allantoin is conditioned by a rapid decomposition of a secondary intermediate compound. Under conditions at which this decomposition is relatively slow the formation of other end products from the primary intermediate substance will predominate. La disparition de l'absorption de la lumière par l'acide urique, produite lors d'expériences enzymatiques, n'est en général pas en corrélation directe avec la disparition de l'acide urique. Les changements spectraux montrent qu'au moins deux substances intermédiaires sont accumulées transitoirement. Elles produisent un retardement dans la disparition de l'absorption dans la région du maximum d'absorption; en même temps apparaît une absorption transitoire à des longueurs d'onde ou l'acide urique n'absorbe pas. L'accumulation des produits intermédiaires est minime en présence d'ions de borate et à un pH ne dépassant pas 8. La première substance intermédiaire, absorbant les rayons ultraviolets longs et courts, est rapidement décomposée en présence de borate. Cette décomposition est indépendante du pH. Les produits finaux ont une absorption très faible, se confinant aux régions d'ondes courtes. La disparition de l'acide urique peut donc être étudiée, ainsi que l'activité de l'uricase, par l'observation de la disparition de l'absorption-maximum de l'acide urique, dans des systèmes contenant du tampon borate de pH 8. La première substance intermédiaire peut être étudiée dans l'absence de borate, et à une longueur d'onde plus élevée, ou l'acide urique n'absorbe plus. Le second produit intermédiaire peut être étudié séparément à des longueurs d'onde plus courtes, quand l'acide urique a disparu, et quand la substance primaire est exclue par l'addition de borate. L'absorption du produit secondaire, ainsi que ses vitesses de formation et de décomposition, augmentent avec le pH. Lorsqu'on compare ces résultats avec ceux de Klemperer, il semble probable que la formation d'allantoine est conditionnée par une décomposition rapide d'un intermédiaire secondaire. Dans des conditions ou cette d'ecomposition est lente, il se formera de la substance intermédiaire première surtout d'autres produits finaux. Das Verschwinden der Lichtabsorption von Harnsäure bei enzymatischen Versuchen ist im allgemeinen kein richtiger Ausdruck für das Verschwinden von Harnsäure. Die dabei auftretenden spektralen Veränderungen zeigen, dass zumindest zwei Zwischenstoffe vorübergehend angehäuft werden, die eine Verzøgerung des Verschwindens der Absorption beim Wellenlängenmaximum und das Auftreten einer vorübergehenden Absorption bei Wellenlängen, bei welchen Harnsäure wenig oder nicht absorbiert, verursachen. Die Anhäufung der Zwischenstoffe ist sehr gering, wenn Borationen vorhanden sind und der pH nicht oberhalb von 8 ist. Der Grund dafür ist, dass der primäre Zwischenstoff, der im lang-, und auch im kurzwelligen Ultraviolett absorbiert, bei Anwesenheit von Borat schnell zersetzt wird. Diese Zersetzung ist pH-unabhängig. Die Endprodukte absorbieren nur schwach und ausschliesslich im kurzwelligen Gebiet. Durch Messungen des Verschwindens der Absorption beim Wellenlängenmaximum von Harnsäure in Systemen mit Boratpuffer von pH 8 kann daher das Verschwinden von Harnsäure verfolgt, und die Uricaseaktivität bestimmt werden. er primäre Zwischenstoff kann bei Abwesenheit von Borat und bei einer höheren Wellenlänge bei der Harnsäure nicht absorbiert, untersucht werden. Der sekundäre Zwischenstoff kann getrennt bei kürzeren Wellenlängen untersucht werden, wenn die Harnsäure verschwunden ist, und wenn der primäre Stoff durch Zufügen von Borat zersetzt worden ist. Die Absorption des sekundären Stoffes ist grösser, wenn der pH zunimmt. Sowohl die Bildungs- wie die Zersetzungsgeschwindigkeit des sekundären Stoffes nimmt mit zunehmendem pH zu. Bei Vergleich dieser Resultate mit den Funden von Klemperer wird es wahrscheinlich, dass die Allantoinbildung durch den schnellen Zerfall einer sekundären Zwischenverbindung bedingt wird. Unter Bedingungen, bei denen dieser Zerfall verhältnismässig langsam ist, ist die Bildung anderer Endprodukte aus dem primären Zwischenstoff vorherrschend.
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