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Méningites aseptiques. Mise en évidence dans le LCR d'ADN bactérien par amplification génique

1995; Elsevier BV; Volume: 14; Issue: 4 Linguagem: Francês

10.1016/s0750-7658(05)80597-0

1769-6623

F Salord, Bénédicte Druel, J. Grando, Valérie Verneau, Christine Perret, François Vandenesch, J. Étienne, R Chacornac,

Infectious Diseases and Tuberculosis

Résumé Développer un moyen diagnostique pour reconnaître l'origine bactérienne ou non bactérienne d'une méningite postopératoire en neurochirurgie, en détectant dans le LCR l'ADN bactérien à l'aide de la technique de PCR (polymerase chain reaction). Étude de laboratoire. Vingt-sept opérés neurochirurgicaux traités en réanimation et satisfaisant aux critères de méningite des CDC (Centers for Disease Control) et ayant plus de 100 polynucléaires neutrophiles par mm3 dans le LCR, ont été répartis en deux groupes : le groupe MB+ (n = 7) en cas de culture de LCR positive ou le groupe MB− (n = 20) en cas de LCR stérile. Par ailleurs, le LCR de 43 patients neurochirurgicaux traités en réanimation, mais sans signes cliniques et biologiques de méningite, ont servi de contrôle. Seize échantillons sur les 43 ont été ensemencés avec des bactéries à des concentrations déterminées. Dans l'ensemble des échantillons de LCR, l'ADN bactérien a été recherché par amplification génique (PCR). Une étude préalable avait montré que la sensibilité de la PCR était de 105 UFC·mL−1 pour 20 cycles et de 103 pour 25 cycles. Les 43 échantillons de LCR stérile, servant de contrôle, n'ont pas donné d'amplification en PCR dans tous les cas à 20 cycles et dans 42 cas sur 43 à 25 cycles. Les 16 échantillons contrôles qui avaient été ensemencés, ainsi que les 7 LCR du groupe MB+ avaient une amplification positive à 20 et 25 cycles. Les 20 LCR du groupe MB− n'avaient pas d'amplification à 20 cycles, mais celleci devenait positive à 25 cycles dans 19 cas sur 20. L'hybridation (southern blot) des produits d'amplification avec une amorce spécifique des procaryotes a été positive pour les LCR du groupe MB+ et du groupe MB− et négative avec les LCR contrôle et l'ADN humain. La présence de bactéries dans le LCR de patients atteints de méningite peut être mise en évidence par l'intermédiaire de la détection d'ADN bactérien. Les méningites aseptiques postopératoires peuvent avoir une origine bactérienne. La PCR peut constituer une technique de routine permettant le diagnostic de méningite bactérienne en moins de 6 heures. De plus, le recours à des oligonucléotides spécifiques permet d'identifier les bactéries en moins de 12 heures. Abstract To develop a diagnostic tool to recognize whether a postoperative meningitis occurring in neurosurgical patients is of bacteriological origin or not, in detecting in CSF bacterial DNA with the polymerase chain reaction (PCR) technique. Laboratory study. Twenty-seven neurosurgical ICU patients associating, in the postoperative period, the CDC criteria of meningitis and a neutrophil polymorphonuclear count over 100 cells·mm−3 were allocated either into the MB+ group (n = 7) when their CSF culture was positive or in the MB− group (n = 20) when the culture was sterile. The CSF of 43 neurosurgical ICU patients without postoperative clinical and biological features of meningitis acted as controls. Sixteen specimens out of the 43 were inoculated with bacteria at a known concentration. The CSF specimens of all patients were tested for the presence of eurcaryote DNA using the PCR technique. Beforehand its sensitivity had been assessed using the inoculated CSF of control group : a positive amplification at 20 cycles was equivalent to 105 CFU·mL−1 and a positive amplification at 25 cycles to 103 CFU·mL−1. In the 43 sterile control CSF specimens the amplification was negative in all at 20 cycles and in 42 at 25 cycles. In the 16 previously sterile control specimens supplemented with bacteria, as well as in the CSF of all 7 patients of MB+ group the amplification was positive at 20 and 25 cycles. In those of MB− group the amplification was negative in all at 20 cycles, but was positive in 19 out of 20 at 25 cycles. Southern blot with specific procaryote probes was positive with amplification products from CSF of MB+ and MB− groups and negative with control CSFs and human DNA. The presence of bacteria in CSF of patients sustaining a meningitis can be accurately detected through their DNA. Postoperative aseptic meningitides may have a bacterial origin. PCR can be used as a routine technique to provide a diagnosis of bacterial meningitis in less than 6 hours. Additionally specific oligonucleotides allow to identify the bacteria in less than 12 hours.