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A Large Scale Method for the Preparation and Sterilization of Ceruloplasmin and Apoceruloplasmin from Human Plasma*

1962; Wiley; Volume: 7; Issue: 4 Linguagem: Francês

10.1111/j.1423-0410.1962.tb03272.x

1423-0410

J. T. Sgouris, F. C. Coryell, H. Gallick, R. W. Storey, K. B. McCall, H. D. Anderson,

Animal health and immunology

Summary A procedure is described for the large scale purification and sterilization of ceruloplasmin and apoceruloplasmin. This procedure has the following advantages over others previously described: Ceruloplasmin and its apoenzyme are prepared in large volumes, using equipment and facilities which are available in any laboratory where the Cohn ethanol method is employed. The starting material (Fraction IV‐1) is abundantly available and is otherwise wasted where major emphasis is placed on the preparation of Dried Fibrinogen, Antihemophilic Globulin, Immune Serum Globulin and Normal Serum Albumin. Other useful plasma components contained in Fraction IV‐1 may be recovered without denaturation; for example, Plasma Thromboplastin Antecedent. The copper‐saturated ceruloplasmin is stable under procedures commonly employed for the destruction of viral contaminants; namely, (a) heat‐treatment for ten hours at 60° C in the final container, or (b) treatment with a variety of concentrations of beta‐propiolactone (at 4° C or 37° C). The use of batch‐type adsorption and elution with DEAE‐cellulose avoids more tedious procedures such as column chromatography and high speed centrifugation. The ethanol chloroform denaturation step occurs late in the process where volumes are small and a closed system may be employed. Other proteins denatured in this step occur in trace quantities and workers are protected from chloroform vapors. Résumé Les auteurs décrivent une méthode pour la purification et la stérilisation de grandes quantités de ceruloplasmine et d'acoperuloplasmine. Cette méthode a, sur les méthodes précédeniment décrites, les avantages suivants: La ceruloplasmine et son apoenzyme peuvent être préparés en grande quatitité dans tout laboratoire équipé pour le fractionnement à l'éthanol selon Cohn. Le matériel de départ (fraction IV —1) s'obtient facilement et en graiide quantité et est en outre inutilisé quand on prépare du fibrinogène desséché, de la globuline antihémophilique, des iminuns globulines sériques et de la sérum‐albumine normale. D'autres composants utiles contenus dans la fraction IV‐1 peuvent être récupérés sans être dénaturés, par exemple le PTA (plasma thromboplastin antecedent) ou facteur XI. La ceruloplasmine saturée en cuivre reste stable malgré les traiteinents usuels ntilisée pour détruire les virus, notamment: a) traitement par la chaleur à 60° C pendant 10 heures, ou b) traitement à diverses concentrations de β‐propriolactone à 4° C ou à 37° C. L'utilisation de la méthode d'absorption et d'élution avec la DEAE‐cellulose évite les méthodes ennuyeuses telles que la chromotographie sur colonne et les centrifugations à haute vitesse. Dans cette méthode, l'étape de dénaturation par le chloroforme et l'éthanol se situe tardivement, au moment où l'on opère sur de petits volumes, si bien qu'un système en circuit fermé peut être utilisé. Les autres protéines déaturées lors de cette étape sont en traces et les opérateurs sont protégés des vapeurs de chloroforme. Zusammenfassung: Es wird eine Methode für die Reinigung und Sterilisation von Coeruloplasmin und Apocoeruloplasmin in größerem Maßabe beschrieben. Das Verfahren hat die folgenden Vorzüge gegenüber früher beschriebenen: Coeruloplasmin und sein Apoenzym können in großen Mengen in jedem Labor, das für Alkoholfraktionierung eingerichtet ist, mittels den dort vorhandenen Geräten gewonnen werden. Das Ausgangsmaterial, Fraktion IV 1 , ist in großen Mengen verfügbar. Sie wird üblicherweise verworfen, wenn sich die Produktion von Fraktionen auf Fibrinogen, AHG, γ‐Globulin‐ und Albuminpräparate beschränkt. Andere wertvolle Plasmakomponenten wie PTA (Plasma Thromboplastin Antecedent) können aus Fraktion IV 1 ohne Denaturierung mitgewonnen werden. Das kupfergesättigte Coeruloplasmin ist unter den üblicherweise für die Inaktivierung von Viren gewählten Bedingungen stabil, so a) 10 h bei 60° C, b) mit beliebigen Konxentrationen von β‐Propiolakton bei 4° oder bei 37° C. Die Adsorption und Elution mit DEAE‐Cellulose im «batch»‐Verfahren macht anspruchsvollere Prozesse wie Kolonnenchromatographie und hochtourige Zentrifugation übedflüssig. Der Äthanol‐Chloroform‐Denatnrierungsschritt gegen Ende der Präparation, wo die Volumina klein sind, läßt sich in einem geschlossenen System durchführen. Andere dabei denaturierte Proteine kommen nur in Spuren vor und die Ausführenden sind vor Chloroformdämpfen geschützt.