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Haemolytic Assay of Sheep Serum Complement 1

1975; Wiley; Volume: 22; Issue: 3 Linguagem: Inglês

10.1111/j.1439-0450.1975.tb00585.x

0931-2021

O. Bárta, Věra Bárta, Ruth A. Shirley, Janet D. McMurry,

Blood Coagulation and Thrombosis Mechanisms

Summary Using rabbit erythrocytes sensitized with sheep antibody as target cells, haemolytic complement activity may be tested in sheep serum. The highest titres were obtained in a glucose or sucrose‐barbital buffer of ionic strength 0.12, i. e., conductivity of 9 millimhos/cm. at 20 °C, pH 6.5, supplied with Ca 2+ to a final concentration of 3 × 10 −4 M and with Mg 2+ to a final concentration of 1 × 10 −3 M. The optimal incubation temperature was 37 °C and time 90 minutes. In the standard technique 0.2 or 0.1 ml. of complement dilution is mixed with 0.2 or 0.1 ml. of a suspension of sensitized rabbit erythrocytes (1 × 10 8 cells/ml.) and 0.6 or 0.3 ml. of buffer. The titres obtained in a limited number of sera were around 32 to 64. Zusammenfassung Nachweis von Schafserumkomplement im Hämolysetest Mittels Kaninchenerythrocyten, welche mit Schafantikörpern sensibilisiert wurden, kann die Aktivität des hämolytischen Komplements im Schafserum nachgewiesen werden. Die höchsten Titer wurden erzielt bei Verwendung eines Glukose‐ bzw. Saccharose‐Barbitalpuffers der Ionenstärke 0,12, d. h. mit einer Leitfähigkeit von 9 millimhos/cm bei 20 °C, pH 6,5, nach Zusatz von Ca ++ in einer Endkonzentration von 3 × 10 −4 M und Mg ++ in einer Endkonzentration von 1 × 10 −3 M. Die optimale Bebrütungstemperatur war 37 °C, 90 min lang. Im Standardversuch wurden 0,2 bzw. 0,1 ml Komplementverdünnung mit 0,2 bzw. 0,1 ml einer Suspension sensibilisierter Kaninchenerythrocyten (1 × 10 8 Zellen/ml) und 0,6 bzw. 0,3 ml Puffer vermischt. In einer begrenzten Anzahl von Seren wurden Titer von 1:32 bis 1:64 nachgewiesen. Résumé Recherche du complèment du sérum de mouton dans le test d'hémolyse L'activité du complément hémolytique dans le sérum ovin a pu être démontrée au moyen d'érythrocytes de lapin sensibilisés avec des anticorps de moutons. Le titre le plus élevé fut obtenu en employant un tampon de barbital avec glucose ou saccharose de concentration ionique 0,12 et une conductivité de 9 milliohms/cm à 20 °C et pH 6,5 après addition de Ca ++ en concentration finale de 3 × 10 −4 M et de Mg ++ de 1 × 10 −3 . La température optimale de réaction fut de 37 °C pendant 90 minutes. Dans l'essai standard, on a mélangé respectivement 0,2 et 0,1 ml d'une suspension d'érythrocytes sensibilisés de lapin (1 × 10 8 cellules/ml) et respectivement 0,6 et 0,3 ml de solution tampon à 0,2 et 0,1 ml de dilution du complément. Des titres de 1/32 à 1/64 ont été trouvés dans un nombre limité de sérums. Resumen Identificación de complemento sérico ovino en la prueba de hemolisis Mediante eritrocitos de conejo, sensibilizados con anticuerpos ovinos, se puede identificar la actividad del complemento hemolítico en el suero ovino. Los títulos máximos se lograron utilizando un tampón barbitúrico glucosado o sacarosado de potencia iónica 0,12, es decir, con una conductividad de 9 milimhos/cm. a 20 °C., pH 6,5, tras adicionar Ca ++ en una concentración final de 3 × 10 −4 M y Mg ++ en una concentración final de 1 × 10 −3 M. La temperatura óptima de incubación era 37 °C., durando 90 min. En el ensayo patrón se mezclaron 0,2 resp. 0,1 ml. de dilución de complemento con 0,2 resp. 0,1 ml. de una suspensión de eritrocitos sensibilizados de conejo (1 × 10 8 células/ml.) y 0,6 resp. 0,3 ml. de tampón. En una cantidad limitada de sueros se pudieron poner de manifiesto títulos comprendidos entre 1:32 y 1:64.