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El descenso del número de linfocitos B de memoria en pacientes con inmunodeficiencia variable común está asociado a una apoptosis aumentada de esta población celular. Desarrollo de un método nuevo para la detección de la apoptosis en muestras de sangre completa

2013; Elsevier BV; Volume: 32; Issue: 1 Linguagem: Espanhol

10.1016/j.inmuno.2013.01.002

2173-9145

Fernanda Gabriela Silva-Carreras, Santiago Sobrecasas, Inmaculada Toboso de Lamo, José Luis Castañer Alabau, Ernesto Roldán Santiago,

T-cell and B-cell Immunology

La inmunodeficiencia variable común (IDVC) es una enfermedad heterogénea caracterizada por una disminución de los valores absolutos de los linfocitos B de memoria en la sangre periférica. A pesar de que esta disminución se ha atribuido previamente a un posible defecto en el desarrollo del centro germinal, las causas permanecen en gran medida desconocidas. Por otro lado, la apoptosis aumentada de los linfocitos B ha sido implicada en la patogénesis de diversas enfermedades. Hasta ahora, sin embargo, no se ha descrito un balance negativo entre apoptosis/supervivencia de los linfocitos B de memoria en los pacientes con IDVC y por ello nos preguntamos si una apoptosis aumentada podría ser relevante en la IDVC. En este estudio determinamos la apoptosis espontánea e inducida de los linfocitos B de memoria de pacientes con IDVC y controles sanos mediante citometría de flujo. La apoptosis se cuantificó mediante la expresión de la anexina v tras un cultivo de 24 h en presencia o ausencia de un anticuerpo monoclonal proapoptótico anti-CD95. Además, desarrollamos un método nuevo y sensible que utiliza 7-amino-actinomicina D (7-AAD) para detectar linfocitos B apoptóticos en sangre completa. Nuestros resultados indican claramente una disminución del valor absoluto de linfocitos B de memoria y una apoptosis incrementada en los pacientes con IDVC con respecto a los controles sanos (p < 0,01). Además, demostramos que el aumento de la apoptosis de esta población celular no está mediado por la molécula CD95. Common Variable Immunodeficiency (CVID) is a heterogeneous disease characterised by low memory B cell counts in peripheral blood (PB). Although previous reports have attributed memory CD27+ B cell decrease to a possible defective germinal centre development, the cause of this defect remains basically unknown. On the other hand, increased apoptosis has been implicated in the pathogenesis of several diseases, and could be another factor that contributes to explain memory B cell reduction. However, a negative balance between apoptosis/survival of memory B cells in CVID patients has still not been documented. Therefore, we asked whether increased apoptosis was relevant in CVID. To test this concept, total and memory B cells from CVID patients and healthy controls were studied by flow cytometry to determine spontaneous and induced apoptosis. Apoptosis was measured by Annexin-V expression after a 24 hour culture with and without anti-CD95 proapoptotic monoclonal antibody. We also developed a new and sensitive method that uses 7-amino-actinomycin D (7-AAD) to measure very low numbers of apoptotic cells in whole PB. Our results clearly indicate diminished absolute counts and higher apoptosis in memory B cells from CVID patients than in healthy controls (P < .01). Moreover, we also demonstrate that CD95 is not implicated in regulating memory B cell apoptosis.