Portal de Periódicos da CAPES

Tubercle bacillary extracts immunogenic for mice 7. electrophoretic analyses

1965; Churchill Livingstone; Volume: 46; Issue: 2 Linguagem: Francês

10.1016/s0041-3879(65)80066-6

1878-6006

Alfred J. Crowle, C.C. Hu,

Bacteriophages and microbial interactions

The water-soluble extract of trypsin-digested tubercle bacilli which specifically immunizes mice and guinea pigs against tuberculosis can be separated by agar gel electrophoresis into two inert fractions and one active one. The two inert constituents are cathodic and are detectable by conventional electrophoresis and immunoelectrophoresis. One is a heavy molecular weight polysaccharide, and the other appears to be a peptide. The immunizing fraction on the other hand, is strongly anodic, having a mobility 1·87 times that of human serum albumin at pH 8·2. It was detected and identified by preparatory electrophoresis coupled with in vivo tests for its immunogenicity, and its mobility then was defined with greater precision by a new technique—two-dimensional immunoelectrophoresis. This modification of conventional immunoelectrophoresis was necessary because of the extreme lability of immunoprecipitates produced by reaction between the immunogen and a specific antiserum. The rapid mobility of the immunogen also was confirmed by two-dimensional agar gel electrophoresis using 6,9-diamino-2-ethoxy-acridine as a semispecific indicator for it: this acridine dye precipitates the immunogen without precipitating the two non-immunogenic contaminants of trypsin extract. The data presented indicate that the immunogen is a very poor inducer of humoral antibody formation. Its strongly anionic charge, taken together with previously published data, suggests that is may be a polysaccharide strongly bound to a negatively charged peptide or that it may be acidic polysaccharide or mucopolysaccharide normally located in the cell wall or cell membrane of tubercle bacilli. L'électrophorése sur gélose permet de séparer, en deux fractions inertes et une fraction active, l'extrait hydro-soluble de bacille tuberculeux trypsinisé, qui immunise la souris et le cobaye de façon spécifique contre la tuberculose. Les deux constituants inertes sont cathodiques, et on peut les détecter par électrophorèse ordinaire et immuno-électrophorèse. L'un est un polysacharride de haut poids moléculaire, et l'autre se révèle être un peptide. Par contre la fraction immunisante est fortement anodique, et possède une mobilité égale à 1,87 fois celle de la serum albumine humaine à pH 8,2. Elle fut détectée et identifiées par une première électrophorèse, complétée par des tests in vivo pour la recherche du pouvoir immunogène; sa mobilité, alors, fut évaluée avec plus de précision par une nouvelle tech-technique—l'immuno-électrophorèse à deux dimensions. L'extrême labilité des immuno-précipités produits par la réaction de la substance immunogène avec l'antiserum spécifique rendait nécessaire cette modification de l'electrophorèse habituelle. On confirmait également la grande mobilité de la substance immunogène par une électrophorèse en gélose à deux dimensions, utilisant la 6,9-diamino-2-éthoxy-acridine comme indicateur semispécifique: en effet, cette acridine donne un précipité coloré avec la substance immunogène, sans précipiter les deux autres fractions non immunogènes de l'extrait trypsinisé. Les faits présentés indiquent que la substance immunogène est est un très faible inducteur pour la formation d'anticorps humoraux. Sa forte charge anionique, rapprochée des faits antérieurement publiés, suggère qu'il s'agit peut-être d'un polysaccharide fortement enchassé dans un peptid de charge négative, ou qu'il s'agit d'un polysaccharide acide ou d'un mucopolysaccharride qui se trouve normallement dans la paroi ou la membrane cellulaire du bacille tuberculeux. El extracto hidrosoluble de bacilos tuberculosos digeridos con tripsina que immuniza especificamente ratones y cobayos contra la tuberculosis, puede ser separado por electroforesis en agar en 2 fracciones inertes y l activa. Los 2 componentes inertes son catódicos y son demonstrables por electroforesis convencional e inmunoelectroforesis; uno es un polisacárido de alto peso molecular y el otro parece ser un peptido. La fracción inmunizante es fuertemente anódica, con una motilidad 1·87 veces mayor que la albúmina humana a pH 8·2. Fué demonstrada e identificada por electroforesis junto con tests in vivo para comprobar su acción inmunogenética, y su motilidad se estableció con gran precisión por medio de una nueva técnica, la inmunoelectroforersis en 2 dimensiones. Esta modificación de la inmunoelectroforesis fué necesaria debido a la gran labilidad de los inmunoprecipitados que se producían por la reacción entre el antígeno y un antisuero específico. La gran motilidad del antígeno fué también confirmada por electroforesis en agar en 2 dimensiones, usando 6, 9, diamino—2 etoxi—acridina como indicador semiespecífico: la acridina precipita el antígeno sin precipitar los 2 componentes no antigénicos del extracto tripsínico. Los datos presentados indican que el antígeno es muy pobre inductor de la formación de anticuerpos humorales. Su carga fuertemente aniónica, junto con otros datos ya comunicados sugieren que debe ser un polisacárido muy unido a un péptido con carga negativa o que debe ser un polisacárido ácido o un mucopolisacárido ubicado normalmente en la pared celular o en la membrana celular del bacilo tuberculoso.