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Characteristics of aldolase variformity

1967; Elsevier BV; Volume: 28; Issue: 6 Linguagem: Francês

10.1016/0006-291x(67)90076-9

1090-2104

Colin Masters,

Protein purification and stability

Des hémolysats bruts, et des préparations d'aldolase purifiées jusqu'à homogénéité à partir de réticulocytes et d'érythrocytes matures ont été incubés avec un antisérum spécifique dirigé contre l'aldolase cristallisée de muscle de lapin.Nous avons montré que la même activité aldolasique correspond à une plus grande quantité d'antigène dans les cellules âgées que dans les jeunes, aussi bien dans les hémolysats bruts que dans les préparations partiellement et totalement purifiées; c'est-à-dire que l'aldolase dans les cellules âgées présente un matériel à réaction immunologique croisée (CRM).Nous avons comparé les propriétés de l'enzyme purifiée à partir de réticulocytes, d'érythrocytes matures et de muscle de lapin:u—l'activité spécifique moléculaire de l'aldolase purifiée d'érythrocyte est plus faible que celle de l'aldolase cristallisée musculaire c'est-à-dire que le CRM est maintenu au cours des étapes de la purification.—l'activité spécifique de l'aldolase de globule rouge vis-à-vis des 2 substrats (FDP et F1P) est plus faible que celle de l'aldolase musculaire. Cependant, le rapport d'activité envers les deux substrats FDP/F1P est diminué dans les globules rouges et les réticulocytes.—Nous n'avons pas trouvé d'autre différence: les poids moléculaires, les constantes de Michaelis vis-à-vis du FDP, les constantes de thermodénaturation, les extrémités C terminales sont identiques.Crude hemolysates, partially purified aldolase and aldolase purified to homogeneity from reticulocytes and mature erythrocytes, were incubated with a specific antiserum raised against crystalline rabbit muscle aldolase. We show that the same aldolasic activity corresponds to a greater amount of antigen in older than in younger cells, in crude hemolysates as well as in the above mentioned preparations; that is to say, old-cell aldolase contains crossreacting material (CRM).Properties of purified enzyme from reticulocytes and mature erythrocytes were compared to those of muscle crystalline aldolase:u—the molecular specific activity of purified aldolase from erythrocytes is lower than with crystalline muscle aldolase, i.e. CRM is maintained throughout the purification steps.—the specific activity of red cell aldolase towards both substrates (FDP and F1P) is lower than that of crystalline muscle aldolase. However, the ratio of activity towards the two substrates FDP/F1P is decreased in erythrocytes and reticulocytes.—no other difference was found: Michaelis constant towards FDP, thermodenaturation constant and C terminal extremities are identical as are the molecular weights.