Portal de Periódicos da CAPES

Anti-messenger oligodeoxynucleotides: specific inhibition of rabbit β-globin synthesis in wheat germ extracts and Xenopus oocytes

1986; Elsevier BV; Volume: 68; Issue: 9 Linguagem: Francês

10.1016/s0300-9084(86)80180-8

1638-6183

Christian Cazenave, Nadine Loreau, Jean‐Jacques Toulmé, Claude Hélène,

Hemoglobin structure and function

Oligodeoxyribonucleotides complementary to the initiation region of rabbit β-globin messenger RNA were used to selectively inhibit translation in a wheat germ extract and in injected Xenopus oocytes. The oligonucleotides interacted specifically with their RNA target as shown by thermal denaturation studies of hybrids on nitrocellulose filters. The longest oligonucleotide used (17-mer) efficiently blocked translation both in vitro and in vivo. In contrast the shortest one (8-mer) exhibited only a limited effect. The translation block was specific. The synthesis of endogenous proteins in oocytes and that of α-globin in the in vitro system were not affected by anti-β-globin oligonucleotides. A non-complementary oligonucleotide had no inhibitory effect. L'inhibition de la synthèse de β-globine de lapin par des oligodésoxyribonucléotides synthétiques a été étudiée dans un système acellulaire (germe de blé), d'une part, et après microinjection dans des ovocytes de xénope, d'autre part. Ces oligonucléotides, dont la taille varie de 8 à 17 nucléotides, sont complémentaires de la région d'initiation de la traduction de l'ARN messager de la β-globine. Ces oligomères s'associent à leur cible ARN, comme l'ont montré des études de dénaturation thermique de complexes oligonucléotides/ARNm sur filtre de nitrate de cellulose. Les molécules les plus longues inhibent efficacement et spécifiquement la traduction du messager de la β-globine aussi bien in vitro qu' in vivo. D'une part, la synthèse d'α-globine dans le germe de blé est peu affectée par la présence d'oligonucléotides anti-β-globine (la faible inhibition observée est attribuée aux homologies de séquence entre les ARN codant pour l'α- et la β-globine), et d'autre part, les protéines endogènes de l'ovocyte ne sont pas inhibées après microinjection des oligonucléotides. Les oligomères les plus courts ont un effet réduit sur la synthèse de β-globine. Enfin, un oligonucléotide n'ayant pas de séquence complémentaire sur l'ARN messager est dépourvu d'activité. L'inhibition spécifique observée est donc la conséquence de la formation d'hybrides oligonucléotides/ARNm et l'efficacité est liée à la stabilité de ces hybrides.