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An ELISA for detection of infectious bursal disease virus and differentiation of very virulent strains based on single chain recombinant chicken antibodies

2005; Taylor & Francis; Volume: 34; Issue: 6 Linguagem: Inglês

10.1080/03079450500367765

1465-3338

S. I. Sapats, G. Gould, L. Trinidad, Lies Parede, Cíntia de David, J. Ignjatovic,

vaccines and immunoinformatics approaches

Two chicken single-chain variable antibody fragments (scFv) designated scFv154 and scFv88, previously shown to react with either all or very virulent (vv) infectious bursal disease virus (IBDV) strains, respectively, were evaluated for use in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for differentiation of vvIBDV. Specificity and sensitivity of the vvIBDV ELISA was assessed when scFv154 and scFv88 were expressed as soluble antibodies (sAb), phage antibodies (pAb) or hyper-phage antibodies (hpAb). The highest test sensitivity and specificity was obtained using hpAb154 to detect all IBDV and pAb88 to differentiate vvIBDV strains. Such an ELISA was eight to 16 times more sensitive for IBDV antigen detection than the mouse monoclonal antibody ELISA. Using field samples, the scFv ELISA was able to differentiate between flocks infected with vvIBDV and those infected with classical or variant IBDV. In one instance IBDV was detected in a flock found to be negative by the monoclonal antibody ELISA. The results showed that scFv can be utilized as highly specific and sensitive ELISA reagents for the detection and discrimination of avian pathogens. Un test ELISA pour la détection du virus de la bursite infectieuse et la différenciation des souches hypervirulentes, basé sur des anticorps recombinants de poulet "simple-chaîne" Deux fragments recombinants "simple-chaîne", dérivés de la partie variable d'anticorps de poulet, désignés scFv154 et scFv88, respectivement connus pour réagir, soit avec toutes les souches de virus de la bursite infectieuse (IBDV), soit avec les souches hypervirulentes (vv), ont été évalués dans un test ELISA utilisé pour la différenciation des vvIBDV. La spécificité et la sensibilité du test ELISA vvIBDV ont été évaluées avec les fragments scFv154 et scFv88 exprimés comme anticorps solubles (sAb) ou associés à des phages (pAb) ou à des hyper-phages (hpAb). Les meilleures sensibilité et spécificité ont été obtenues avec le test utilisant le hpAb154 pour détecter tous les IBVD et le pAb88 pour différencier les souches d'IBVD. Un tel test ELISA a été 8 à 16 fois plus sensible pour la détection de l'antigène IBDV que le test ELISA utilisant un anticorps monoclonal (Mab) de souris. Avec les échantillons du terrain, le test ELISA scFv a été capable de différencier les troupeaux infectés par le vvIBDV de ceux infectés par les souches classiques ou variantes d'IBDV. Dans un cas, l'IBDV a été détecté dans un troupeau qui s'était révélé négatif avec le test ELISA Mab. Les résultats ont montré que les scFv peuvent être utilisés comme des réactifs ELISA très spécifiques et sensibles pour la détection et la discrimination des agents pathogènes aviaires. Ein auf rekombinanten Hühner-Einzelkettenantikörpern basierender ELISA für den Nachweis des Virus der infektiösen Bursitis und die Differenzierung von hochvirulenten Stämmen Zwei Hühner-Einzelkettenantikörper-Fragmentvariable (scFV), scFv154 und scFv88, mit denen bereits nachgewiesen worden war, dass sie mit allen bzw. nur mit hochvirulenten (vv) Stämmen des Virus der infektiösen Bursitis (IBDV) reagierten, wurden untersucht hinsichtlich ihrer Eignung für einen ELISA zur Differenzierung von vvIBDV. Die Spezifität und Sensitivität des vvIBDV-ELISA wurde bestimmt unter Verwendung von scFv154 und scFv88 als lösliche (sAB), Phagen (pAB)- oder Hyper-Phagen (hpAB)-Antikörpern. Die höchste Sensitivität und Spezifität wurde mit hpAB154 zum Nachweis aller IBDV und mit pAB88 bei der Differenzierung von vvIBDV-Stämmen erreicht. Dieser ELISA war 8-16mal sensitiver für den Nachweis von IBDV-Antigen als der ELISA mit monoklonalen Antikörpern von der Maus (Mab). Bei der Untersuchung von Feldseren konnte der scFv-ELISA zwischen Herden, die mit vvIBDV und mit klassischen oder Variant-IBDV-Stämmen infiziert waren, unterscheiden. In einem Fall wurde IBDV in einer Herde nachgewiesen, die bei der Untersuchung mit dem Mab-ELISA negativ war. Die Ergebnisse zeigen, dass die scFv als hochspezifische und -sensitive ELISA-Reagentien für den Nachweis und die Differenzierung von aviären Pathogenen geeignet sind. Un ELISA para detectar virus de bursitis infeccosa aviar y diferenciación de cepas muy virulentas en base a los anticuerpos de cadena simple recombinantes Dos fragmentos de anticuerpos variables de pollo de cadena simple (scFv) designados scFv154 y scFv88, que previamemte se había demostrado que reaccionaban con todos, o con cepas muy virulentas (vv) de virus de bursitis infecciosa aviar (IBDV), respectivamente, fueron evaluados para ser usados en un ELISA para diferenciar vvIBDV. La especificidad y la sensibilidad del ELISA vvIBDV fue determinada cuando scFv154 y scFv88 se expresaron como anticuerpos solubles (sAb), fagos (pAb) o hiper-fagos (hpAb). La especificidad y la sensibilidad más altas se obtuvieron usando hpAb154 para detectar todos los IBDV y pAb88 para diferenciar las cepas vvIBDV. Este ELISA fue de 8 a 16 veces más sensible para la detección del antígeno de IBDV que el ELISA de anticuerpos monoclonales de ratón (Mab). Con muestras de campo, el scFv ELISA fue capaz de diferenciar los lotes infectados con vvIBDV de los infectados con cepas clásicas o variantes de IBDV. En un caso, IBDV se detectó en un lote que fue negativo al Mab ELISA. Los resultados mostraron que los scFv pueden ser utilizados como reactivos de ELISA muy específicos y sensibles para la detección y discriminación de patógenos aviares.