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Effects of cryoprotectant and plunging temperature in liquid nitrogen on the in vitro and in vivo development of murine morulae

2000; UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO; Volume: 37; Issue: 3 Linguagem: Português

10.1590/s1413-95962000000300012

1678-4456

T Pantano, Marco Roberto Bourg de Mello, José Fernando Garcia, Linda Lee Ho, José Antônio Visintin,

Growth and nutrition in plants

Os efeitos das temperaturas de imersao em nitrogenio liquido e dos metodos de remocao dos crioprotetores foram avaliados em morulas de camundongos congeladas em etilenoglicol (E), propilenoglicol (P) e glicerol (G). Os embrioes foram equilibrados em E (1,5M), P (1,5M) ou G (1,4M) por 10 minutos e envasados em palhetas de 0,25 ml com crioprotetor nas tres colunas (E1, P1 G1) ou PBS nas colunas das extremidades (E2, P2). As palhetas foram resfriadas a 0,5oC/minuto ate -25 ou -30oC e imersas em nitrogenio liquido. A descongelacao dos embrioes foi feita em agua a 22oC por 20 segundos. O crioprotetor dos embrioes congelados em glicerol (Gl) foi removido em 3 etapas, dos congelados em etilenoglicol e propilenoglicol com crioprotetor nas 3 colunas (El e Pl) removido diretamente em PBS e dos congelados em etilenoglicol e propilenoglicol com PBS nas colunas das extremidades (E2, P2), apos mistura das tres colunas dentro da palheta, em PBS. Nao houve influencia da temperatura de imersao sobre o desenvolvimento embrionario in vitro, observando maior taxa (p < 0,0001) para El (69,2%) que para E2 (60,3%), Gl (51,9%) e a combinacao P1 e P2 (46,9%). Para o desenvolvimento in vivo, a taxa de fetos foi menor (p < 0,07) para o grupo E1-25 do que para o Controle; Gl-30oC; El-30oC e E2-25oC. Pode-se concluir que in vitro o melhor crioprotetor foi o etilenoglicol com remocao direta em PBS e que in vivo o etilenoglicol e o glicerol foram semelhantes a -30oC.