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An efficient micro-method of DNA isolation from mature leaves of four hardwood tree species Acer, Fraxinus, Prunus and Quercus

1999; EDP Sciences; Volume: 56; Issue: 3 Linguagem: Francês

10.1051/forest

1878-6545

François Lefort, Gerard C. Douglas,

Yeasts and Rust Fungi Studies

It is difficult to purify DNA from mature tree leaves at the end of the growing season, because of their thick cell wall, and high content in polysaccharides, phenolic compounds and endonucleases.A simple, fast and efficient method for DNA purification from 100 mg fresh weight leaf samples is described here.It has been developed for extracting DNA from mature leaves of Quercus, Fraxinus Prunus and Acer.The protocol is a modified CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide) method including a combina- tion of β-mercaptoethanol, polyvinylpyrrolidone, sodium dodecyl sulfate and lithium chloride including short centrifugation runs.It is very efficient yielding up to 950 μg DNA/g of fresh weight, even when very mature leaves are processed.The extracted DNA was used as template to characterise oaks by microsatellite analysis.Its efficiency has been compared to four commercially available kits and two other published.CTAB protocols.The protocol is also inexpensive compared to commercial kits. (© Inra/Elsevier, Paris.)Acer / DNA purification / Fraxinus / Prunus / Quercus Résumé -Une micro-méthode d'extraction d'ADN à partir de feuilles matures de quatre espèces d'arbres forestiers Acer, Fraxinus, Prunus et Quercus.Il est difficile de purifier l'ADN de feuilles d'arbres à maturité et spécialement à la fin de la période de croissance c'est-à-dire en automne, pour plusieurs raisons, telles que de fortes concentrations de polysaccharides, de composés phénoliques et d'endonucléases ainsi que des parois cellulaires épaisses.Nous décrivons une micro-méthode efficace et rapide per- mettant de purifier de l'ADN à partir de 100 mg de poids frais de feuilles à maturité des espèces d'arbres suivantes : Quercus robur, Q. petraea, Fraxinus excelsior, Prunus avium et Acer pseudoplatanus.Le protocole est basé sur l'utilisation de bromure d'hexadé- cyltriméthylammonium (CTAB) combiné a l'emploi de β-mercaptoéthanol, de polyvinylpyrrolidone, de sodium dodécyl sulfate et de chlorure de lithium.Cette micro-méthode permet d'obtenir jusqu'à 950 μg DNA / g de poids frais.L'ADN, extrait d'une variété de matériels végétaux (culture in vitro, matériel de serre ou prélevés en forêt) par cette méthode, est de la qualité nécessaire aux tech- niques de biologie moléculaire (digestion enzymatique, clonage ou amplification par la réaction de la polymérase en chaîne (PCR) de marqueurs microsatellites).Son efficacité comparée à celle de quatre protocoles commercialisés et deux autres protocoles basés sur l'emploi de CTAB est supérieure en rendement et qualité.Ce protocole a enfin l'avantage d'être bon marché par rapport aux protocles commerciaux.(© Inra/Elsevier, Paris.)