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Neuroprotección de las células ganglionares de la retina

2003; Elsevier BV; Volume: 78; Issue: 3 Linguagem: Espanhol

10.4321/s0365-66912003000300006

1989-7286

M García, Javier Ruiz Ederra, E Hernández Barbáchano, JA Urcola, José Ramón Bilbao, Javier Araiz, JA Durán, Elena Vecino,

Neurological Disorders and Treatments

espanolObjetivo: Estudiar la supervivencia de las celulas ganglionares de la retina (CGR) de cerdo en cultivo, analizando el posible efecto neuroprotector de las celulas de Muller de la retina (CMR) y del factor neurotrofico derivado del cerebro (BDNF). Metodos: Las retinas de cerdo adulto fueron disociadas y cultivadas en diferentes condiciones: 1) sobre sustrato de laminina/poli-D-lisina en medio de cultivo quimicamente definido; 2) sobre sustrato de laminina/poli-D-lisina en medio quimicamente definido al que se anadio BDNF; 3) sobre monocapas de CMR en medio quimicamente definido; 4) sobre sustrato de laminina/poli-D-lisina en medio condicionado procedente del sobrenadante de las CMR. Las CGR fueron identificadas mediante inmunocitoquimica, utilizando anticuerpos contra el neurofilamento de 68 kDa, y observadas con un microscopio de fluorescencia. Se analizo la supervivencia para cada condicion de cultivo y se clasificaron las CGR en funcion de su tamano y del numero y longitud de las neuritas. Resultados: La supervivencia de las CGR aumento cuando las celulas fueron cultivadas sobre monocapas confluentes de CMR o en medio condicionado. Estas condiciones produjeron un incremento en el area media de las celulas y un aumento en el numero de neuritas emitidas por cada celula, asi como en la longitud de las neuritas. Cuando el medio de cultivo se suplemento con BDNF no se obtuvo ningun efecto sobre la supervivencia de las CGR aunque aumento el tamano, y el numero y longitud de sus neuritas. Conclusion: Nuestro trabajo demuestra que algun/os factor/es secretados por las celulas de Muller tienen un efecto neuroprotector sobre las CGR in vitro. El BDNF produce tambien un incremento en el area media de las celulas y favorece la formacion de neuritas, sin embargo no aumenta la supervivencia. EnglishPurpose: To study the pig retinal ganglion cell (RGC) survival in culture, analysing the possible neuroprotective effect of retinal Muller glia (RMG) and brain-derived neurotrophic factor (BDNF). Methods: Adult pig retina were dissociated and cultured under different conditions: 1) on laminin/poly-D-lysine-coated coverslips in chemically defined medium (CDM); 2) on laminin/poly-D-lysine-coated coverslips in CMD supplemented with BDNF; 3) on confluent monolayer cultures of RMG in CDM; 4) on laminin/poly-D-lysine substrate in conditioned medium obtained from RMG. RGCs were identified by immunocytochemistry using antibody against 68 kDa neurofilament and observed under an fluorescent microscope. RGCs were classified on the basis of the size, number and length of neurites, and their survival was assayed for each treatment. Results: Confluent RMG substrates and RMG conditioned medium significantly increased the survival of cultured pig RGC. Moreover these two conditions increased the mean area of RGCs and enhanced neurite growth and elongation. Addition of BDNF to culture medium did not modify survival but increased RGC size, neurite number and neurite length. Conclusions: These findings demonstrate that factor(s) secreted by RMG exert beneficial effects on adult RGC survival and neurite regeneration in vitro, and might constitute important agent(s) for RGC neuroprotection. BDNF also increases the mean area of RGCs and enhances neurite growth but it does not increase the survival of RGCs.