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A New Spectrophotometric Method for Determining the Enzymatic Activity of endo-β-mannanase in Seeds

2014; Brazilian Chemical Society; Linguagem: Português

10.5935/0103-5053.20140102

1678-4790

Gevany Paulino de Pinho, Juliana R. M. Matoso, Flaviano Oliveira Silvério, Welha C. Mota, Paulo Sérgio Nascimento Lopes, Leonardo Monteiro Ribeiro,

Phytase and its Applications

O objetivo deste trabalho foi desenvolver um novo método espectrofotométrico, de elevada sensibilidade, eficiente e de fácil execução para determinar a atividade enzimática da endo-βmananase em sementes.O método espectrofotométrico foi otimizado e aplicado em amostras de sementes de Butia capitata para determinar a localização da atividade enzimática em diferentes partes das sementes.O método consiste em extrair a enzima da semente e utilizá-la para hidrolisar o galactomanano Locust Bean Gum.Os açúcares redutores formados reagem com a hidrazida ácida p-hidroxibenzóico e são quantificados por espectrofotometria na região do visível.O método otimizado e validado apresentou baixos limites de quantificação para o açúcar redutor formado (0,6 µg de manose) e atividade da endo-β-mananase (1 mU).Apenas 5 mg de sementes em germinação são necessárias para executar o método.The objective of this study was to develop a new, highly sensitive, efficient and easy touse spectrophotometric method to determine the enzymatic activity of endo-β-mannanase in seeds.The method was optimized and applied to determine the site of enzyme activity in different parts of seeds of Butia capitata.It consists in using the enzyme extracted from seeds to hydrolyze Locust bean gum galactomannan.The reducing sugars react with p-hydroxybenzoic acid hydrazide and are quantified by spectrophotometry in the visible region.The optimized and validated method showed low limits of quantification for the reducing sugars (0.6 µg mannose) and endo-β-mannanase activity (1 mU).Only 5 mg of germinating seeds are needed to perform the method.