Produção Nacional
Avaliação da expressão gênica de fatores de transcrição associados à transição epitélio-mesenquimal em cultivo de células-tronco cancerosas oriundas de neoplasias mamárias de cadelas (projeto em andamento)
2015; Volume: 13; Issue: 1 Linguagem: Português
ISSN
2596-1306
AutoresPatricia Mendes Jorge Xavier, Yonara de Gouveia Cordeiro, Arina Lázaro Rochetti, Heidge Fukumasu,
Tópico(s)Cancer Research and Treatments
ResumoIntroducao e objetivos: assim como em mulheres, as neoplasias mamarias representam o tipo mais frequente de câncer em cadelas. Esse tipo de neoplasia apresenta grande heterogeneidade celular o que torna complexa a sua classificacao histopatologica, alem de possivelmente ser o fator responsavel pela grande diversidade de resposta aos tratamentos de eleicao como exerese e quimioterapia. Recentemente tem sido estudado um grupo de celulas denominadas celulas-tronco cancerosas (CTCs), descritas como as principais responsaveis pelas falhas nas quimioterapias, formacao de metastases e no aparecimento de recidivas tumorais, o que as torna um importante alvo para terapias especificas. Entretanto, alguns problemas sao o seu isolamento e cultivo. Alguns estudos recentes realizaram inducao do processo de transicao epitelio-mesenquimal com a superexpressao de alguns fatores de transcricao como, Twist, Snail e ZEB, promovendo linhagens com capacidade de manutencao de caracteristicas de CTCs. O presente trabalho foi delineado para a avaliacao da expressao genica dos fatores de transcricao associados a transicao epitelio-mesenquimal em diferentes cultivos de celulas oriundas de neoplasias mamarias de cadelas, para futuramente ser utilizada a sua superexpressao como potencial indutor deste processo em cultivos celulares. Material e metodos: quatro linhagens celulares foram caracterizadas quanto sua malignidade segundo o tempo de duplicacao, cariotipo e expressao de marcadores como citoqueratina e vimentina. As celulas foram cultivadas em meio DMEM, suplementado com 1% MEGS, 0,5% de SFB e 1% de antibiotico. Ao ser atingido 80% de confluencia tiveram seu RNA total extraido pelo reagente Trizol (Life Technologies). A quantidade e a qualidade do RNA total foram avaliadas (BioAnalyzer Agilent). A conversao de mRNA para cDNA foi realizada com o Kit SuperScript III Reverse Transcriptase (Life Technologies) que sera utilizado para analise de expressao genica por Real-Time PCR dos fatores de transcricao (FT) ZEB1, ZEB2, STAT3 e Slug. O FT que apresentar menor expressao nas quatro linhagens sera escolhido para a tecnica de transgenia para sua superexpressao. Resultados: Quatro linhagens celulares oriundas de neoplasias mamarias (020/14; 025/14, 028/14 e 030/14) ja foram isoladas e caracterizadas em testes de cariotipo, tempo de duplicacao e expressao de marcadores citoqueratina e vimentina. Alem disso, ja foi realizada a padronizacao da tecnica de expressao genica para os genes ZEB1 e ZEB2. Conclusao: Pela padronizacao dos primers, pode-se sugerir a existencia de baixa expressao dos genes ZEB1 e ZEB2 nas quatro linhagens estudadas. Porem, ainda e necessaria a realizacao de estudos de analise de expressao genica para confirmacao dos dados.
Referência(s)