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Molecular epidemiology of isolates of the Cryptococcus neoformans species complex from Spain

2009; Elsevier BV; Volume: 26; Issue: 2 Linguagem: Espanhol

10.1016/s1130-1406(09)70021-x

2173-9188

Susana Frasés, Consuelo Ferrer, Manuel Sánchez, María Francisca Colom,

Plant Pathogens and Fungal Diseases

To study genetic diversity of Cryptococcus neoformans species complex in Spain, 97 isolates of the yeast recovered from human, animal and environmental samples have been analysed using three molecular epidemiological techniques. One of these, URA5 gene fragment length polymorphism (RFLP) analysis, has been previously described as a molecular epidemiology tool. Thus, standard profiles and reference strains have been defined for it. In addition, 5S rDNA/IGS RFLP and [GACA]4 microsatellite PCR fingerprinting were also used. Our results show five of the previously defined URA5 genotypes with a high frequency (33%) of the VNI type, which is in concordance with other studies. The high presence of VNIII pattern (28.9%) among our strains is remarkable and could be a specific feature of the isolates from our country. 5S rDNA/IGS RFLP showed a low intra-species discriminative power. Three different molecular profiles (S1-3), which showed a good correlation with the different species, varieties and genotypes, were obtained. [GACA]4 microsatellite PCR-fingerprinting analysis showed a high variability of patterns among the studied strains. Molecular profiles represented in a dendrogram clustered strains in four main groups related with the source of the yeast and also in concordance with some of the described genotypes (VNI-IV and VGI). Para ampliar el conocimiento de la diversidad genética que presenta el complejo Cryptococcus neoformans en España, se analizaron 97 aislamientos de esta levadura obtenidos a partir de muestras ambientales, veterinarias y clínicas, utilizando 3 técnicas epidemiológicas moleculares diferentes. Uno de estos marcadores moleculares, el análisis del URA5 RFLP, se ha descrito previamente como herramienta epidemiológica, por lo que se dispone de perfiles estándar y cepas de referencia. Además, se utilizaron también el análisis del RFLP del 5S rDNA/IGS y la huella digital tras amplificación por PCR de la secuencia microsatélite [GACA]4. Nuestros resultados muestran 5 de los genotipos URA5 con una elevada frecuencia del tipo VNI (33%), lo que concuerda con otros estudios. Es de resaltar la elevada presencia del perfil VNIII entre nuestras cepas (28,9%), lo que podría ser el rasgo específico más destacable de los aislamientos de nuestro país. El marcador 5S rDNA/IGS mostró un bajo poder discriminativo intraespecie. Se obtuvieron 3 perfiles moleculares distintos (S1-3), que presentaron una buena correlación con las especies, variedades y genotipos. La obtención de perfiles de huella digital con [GACA]4, presentó una gran variabilidad entre las cepas estudiadas. La representación en dendrograma agrupó las cepas en 4 agrupamientos principales relacionados con el origen de las levaduras y también con cierta concordancia con los genotipos descritos (VNI-IV y VGI).