EVALUACIÓN DE DIFERENTES MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE ADN DE MICOPLASMAS PARA SU EMPLEO EN EL DIAGNÓSTICO POR PCR
2009; Volume: 31; Issue: 2 Linguagem: Espanhol
ISSN
2304-7623
AutoresYenney Hernández, Evelyn Lobo, Siomara Martínez, Loidy Zamora,
Tópico(s)Plant Pathogenic Bacteria Studies
ResumoEl objetivo del presente trabajo fue evaluar diferentes metodos de extraccion de ADN de micoplasmas, para su empleo en el diagnostico por PCR. La caracterizacion de la cepa de Mycoplasma arginini utilizada como control positivo, se realizo con el empleo de los estudios morfologicos y las pruebas bioquimicas y enzimaticas. A continuacion se procedio a la obtencion de un cultivo homogeneo de la cepa de Mycoplasma arginini, que permitiera evaluar tres metodos de extraccion de ADN de micoplasmas para su utilizacion en el ensayo de PCR. Se probaron los metodos de extraccion fenol - cloroformo, centrifugacion y centrifugacion con choque termico en muestras clinicas de cultivos celulares, sueros y productos biofarmaceuticos, que habian sido testadas por el metodo de cultivo y la Hibridacion de Acidos Nucleicos (HAN). Como resultado se obtuvo la cepa de Mycoplasma arginini caracterizada y evaluada. Tanto el metodo de fenol-cloroformo, como la centrifugacion y centrifugacion con choque termico, mas sencillos, brindaron similares resultados cuando se realizo la PCR utilizando la cepa tipo de Mycoplasma arginini. Se demostro que los metodos de choque termico y centrifugacion son eficientes para la obtencion de ADN de micoplasmas a partir de muestras clinicas con el empleo de la PCR, comparandose estos resultados con los obtenidos por cultivo y la HAN
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