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Validation of high-performance liquid chromatography methods for determination of zidovudine, stavudine, lamivudine and indinavir in human plasma

2007; Sociedad Española de Farmacia Hospitalaria; Volume: 31; Issue: 4 Linguagem: Espanhol

10.1016/s1130-6343(07)75381-3

2171-8695

Alicia Tarinas, R.D. Tápanes, Gustavo Ferrer, José L. Pérez,

Hepatitis C virus research

Simple methods for the determination of zidovudine (AZT), stavudine (d4T), lamivudine (3TC) and indinavir (INV) in human plasma by reversed-phase liquid chromatography (HPLC) with UV detection were described and validated. Solid-liquid extraction procedures were applied to the samples prior to analysis. Chromatography was performed on a C-18 analytical columns and the retention time ranged from 6.8 to 8.0 min for stavudine, 7.5 to 9.0 min for lamivudine, 11.2 to 11.9 min for zidovudine and indinavir. Four methods were validated for specificity, inter-and intra-assay precision and accuracy, absolute recovery and stability. Analytical curve ranged from 10-1600 ng/ml for stavudine, 50-3200 ng/ml for lamivudine, 0.05-5.0 μg/ml for zidovudine and 0.1-10.0 μg/ml for indinavir. Analytes stability during sampling processing and storage were established. Extraction recoveries are higher than 89% for all formulations. These methods proved to be simples, accurate and precise, and are currently in use in our laboratory for the quantitative analysis of antiretrovirals products in plasma, and for further pharmacokinetics and bioequivalence studies. Fueron descritos y validados métodos analíticos simples para la determinación de zidovudina (AZT), estavudina (d4T), lamivudina (3TC), e indinavir (INV) en plasma humano por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) con detección UV. Se aplicó la extracción en fase sólida para la preparación de las muestras previo al análisis. La corrida cromatográfica se realizó en una columna analítica C-18 y el tiempo de retención se movió en un rango de 6,8-11,9 min para d4T, 7,5-9,0 para 3TC y 11,2-11,9 para AZT e INV. Se validaron 4 métodos en cuanto a especificidad, precisión y exactitud entre días y en el día, así como recobrado y estabilidad. Los rangos de concentraciones de las curvas analíticas eran de 10-1600 ng/ml para d4T, 50-3200 ng/ml para 3TC, 0,05-5,0 μg/ml para AZT y 0,1-10,0 μg/ml para INV. Se demostró la estabilidad del analito durante el procesamiento de las muestras y el almacenamiento. Para las 4 formulaciones los resultados del por ciento de recobrado fue superior al 89%. Estos métodos demostraron ser simples, exactos, precisos y son los utilizados actualmente en nuestro laboratorio para el análisis cuantitativo de productos antirretrovirales en plasma, así como para posteriores estudios de farmacocinética y bioequivalencia.