Produção Nacional
Optimizacao da extracao e amplificacao de DNA de Theobroma cacao L. visando obtencao de marcadores RAPD
2002; Volume: 14; Issue: 2 Linguagem: Português
ISSN
0103-3816
AutoresFábio Gelape Faleiro, Ioná Santos Araújo, Rita C.S Bahia, Reinaldo F Santos, Milton Macoto Yamada, Dário Anhert,
Tópico(s)Peanut Plant Research Studies
ResumoA extracao e amplificacao de DNA sao etapas basicas e de grande importância para a qualidade das informacoes geradas por marcadores moleculares. O objetivo desse trabalho foi realizar testes para ajustar as metodologias de extracao e amplificacao de DNA de Theobroma cacao. Os testes foram realizados a partir da metodologia de extracao do CTAB e de amplificacao via PCR para obtencao de marcadores RAPD. Foram observados nos testes que a utilizacao de CTAB a 2,8% no tampao de extracao e durante a segunda lavagem com cloroformio-alcool isoamilico aumentou consideravelmente a quantidade e qualidade de DNA extraido e que a utilizacao de proteinase K (100 μg/mL) influenciou positivamente a integridade e a qualidade do DNA. A idade da folha utilizada para a extracao de DNA influencia a qualidade do mesmo, sendo que as folhas com maturacao intermediaria (coloracao verde claro) foram as mais adequadas. Os testes utilizados para ajuste de amplificacao mostraram que o aumento da concentracao da Taq polimerase pode comprometer o aparecimento de algumas bandas. Foram testados diferentes programas para PCR e a utilizacao do programa 94 oC por 60 s; 40 ciclos (94 oC por 15 s, 35 oC por 30 s, 72 oC por 90 s), 72 oC por 7 min e reducao para 4 oC proporcionou melhor qualidade do padrao de bandas amplificadas. Os ajustes realizados foram de grande importância para diminuir os custos e melhorar a qualidade das informacoes geradas, possibilitando assim o desenvolvimento de diferentes trabalhos genetico-moleculares utilizando a tecnica de RAPD.
Referência(s)