Portal de Periódicos da CAPES

Padronização de metodologia para estimativa do volume de sangue ingerido por flebotomíneos

2017; UNIVERSIDADE EST.PAULISTA JÚLIO DE MESQUITA FILHO; Volume: 38; Linguagem: Português

2179-443X

Flávia Benini da Rocha Silva, Vicente Estevam Machado, Danilo C. Miguel, Mara Cristina Pinto,

Academic Research in Diverse Fields

Introducao: Os flebotomineos sao dipteros hematofagos que necessitam de repasto sanguineo para o desenvolvimento de seus ovos e sao importantes na transmissao de patogenos. A especie Nyssomyia neivai e incriminada como vetor do agente etiologico da leishmaniose cutânea. Mensurar a quantidade de sangue ingerida por esses insetos e um parâmetro importante para varios estudos biologicos. Para culicideos, ja havia uma metodologia padronizada para mensuracao do volume de sangue ingerido, mas para flebotomineos ainda nao. Objetivo: Estabelecer curvas padrao para avaliacao do volume de sangue ingerido por flebotomineos. Metodologia: A metodologia para avaliacao do volume de sangue, padronizada inicialmente para Aedes aegypti, foi ajustada para os flebotomineos devido ao menor volume de sangue ingerido por eles. Para a obtencao das curvas padrao, dois camundongos anestesiados com cetamina 10% (0,20mL/200g) + xilazina 2% (0,05mL/200g) foram inoculados intravenosamente, um com PBS e outro com corante azul de Evans diluido em PBS (200 mg/kg). Passados 10 minutos, foram retirados 10 μL de sangue de cada um dos camundongos, que foram diluidos em 250 μL de H2O deionizada cada um. Com metade do volume foi realizada diluicao seriada em H2O deionizada (1:2) e 100 μL de cada diluicao foram transferidos para uma placa de 96 pocos para leitura de absorbância em 540 e 620 nm, comprimentos de onda de maxima absorbância da hemoglobina e do corante azul de Evans, respectivamente. Para estimar o volume de sangue ingerido por cada um dos flebotomineos, foram oferecidos dois camundongos anestesiados como fonte de alimentacao, um injetado com PBS e outro com azul de Evans. Apos o periodo de alimentacao, os insetos foram colocados em congelador por meia hora e individualizados em microtubos de 1,7 mL contendo 125 μL de H2O deionizada. Apos maceracao dos insetos e homogeneizacao, 100 μL do sobrenadante de cada um foram transferidos para uma placa de 96 pocos para leitura da absorbância a 540 e 620 nm. A partir da equacao da reta de cada uma das curvas obtidas e dos valores de absorbância de cada inseto, foram calculados os volumes de sangue ingerido por eles. Resultados e discussao: A partir das diluicoes seriadas do sangue com PBS e com azul de Evans, foi possivel obter duas curvas padrao de absorbância versus volume de sangue para os dois comprimentos de onda. Feito o calculo do volume de sangue ingerido por cada inseto, obteve-se uma media de 1,20 μL para as femeas alimentadas no camundongo injetado com PBS e de 1,28 μL para as femeas alimentadas no camundongo injetado com corante azul de Evans, nao havendo diferenca significativa entre eles (p>0,05). Conclusao: Foi possivel obter as curvas padrao para estimativa do volume de sangue ingerido pelos flebotomineos. Alem disso, demonstrou-se que o corante nao interfere na alimentacao das femeas quando oferecidas duas fontes de alimentacao sanguinea simultaneamente.