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ESTUDIO DEL QUIMERISMO HEMATOPOYÉTICO EN EL TRASPLANTE ALOGÉNICO DE MÉDULA ÓSEA

2004; Ferrata Storti Foundation; Volume: 89; Linguagem: Espanhol

1592-8721

Álvaro Urbano‐Ispizua, Francesc Fernández‐Avilés, Javier Briones, Marta Aymerich,

Genetic Syndromes and Imprinting

Introduccion En los ultimos anos, las tecnicas basadas en el analisis del ADN se han constituido en la principal herramienta para el estudio del quimerismo. Si bien el Southern blot era la tecnica mas usada, esta ha sido sustituida por la reaccion en cadena de la polimerasa (PCR). Ademas, tambien han ido cambiando los distintos tipos de polimorfismos de ADN utilizados para distinguir al donante del paciente. En el momento actual, el mas empleado es el denominado de secuencias polimorficas repetitivas STR (short tandem repeat)1-3. Para un correcto estudio del quimerismo, los marcadores utilizados deben ser capaces de distinguir el ADN de dos individuos emparentados, esto es ser informativos, y la tecnica empleada debe poder detectar material genetico de ambos aun cuando la cantidad de uno de ellos este muy poco representada en la muestra biologica, es decir ha de ser suficientemente sensible. El cumplimiento de estos dos conceptos es crucial para una correcta clasificacion de los pacientes en cuanto a su “estado quimerico”. La sensibilidad obtenida va a depender de la tecnica utilizada para el estudio, aunque existen otros factores que, como se vera mas adelante, tambien pueden influir. En general, la PCR es la tecnica de mayor sensibilidad y, por tanto, la recomendada para el analisis del quimerismo1-4. La eleccion de los marcadores polimorficos que se van a analizar es igualmente importante para obtener un resultado correcto y evitar interpretaciones erroneas. Deben de cumplir dos requisitos: a) un alto indice de heterozigosidad, y b) un numero elevado de alelos en la poblacion. Lo ideal es que el donante y el paciente no tengan ningun alelo en comun, y en el caso de que lo tuvieran, el donante y el paciente han de tener un alelo especifico de cada uno no compartido. Los STR presentan las caracteristicas que ha de tener todo marcador genetico susceptible de ser utilizado en el analisis del quimerismo; por otra parte, el pequeno tamano de las secuencias hace que todas ellas se puedan detectar mediante PCR y, en muchos casos, incluso es posible el estudio simultaneo de varios loci STR mediante la PCR multiplex. Si esta se combina con una tecnica automatizada de tincion multicolor de los cebadores y lectura en ABI Prism, podremos definir el tamano de los diferentes fragmentos amplificados y cuantificar cada uno de ellos5. El estado del quimerismo hematopoyetico conviene analizarlo en poblaciones celulares puras de linfocitos T y de neutrofilos, que pueden facilmente separarse mediante metodos fisicos o inmunomagneticos. Con estos metodos, en la fraccion linfoide T, mas del 95 % de las celulas son CD3+, detectadas mediante citometria de flujo6 (fig. 1).