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Eficácia da terapia fotodinâmica in vitro mediada por azul de metileno contra biofilmes de Propionibacterium acnes

2017; UNIVERSIDADE EST.PAULISTA JÚLIO DE MESQUITA FILHO; Volume: 38; Linguagem: Português

2179-443X

Maria Lucia Frade, Sarah Raquel de Annunzio, Carla Raquel Fontana,

Phytochemistry Medicinal Plant Applications

Introducao: A acne vulgar e a mais frequente entre as doencas de pele. Esta presente em adolescentes e adultos jovens, sendo mais prevalente no sexo masculino e mais precoce no sexo feminino podendo, em alguns casos, deixar profundas cicatrizes. A principal causa da acne e a proliferacao da bacteria Propionibacterium acnes (P. acnes) na unidade pilossebacea, devido ao aumento da producao de sebo, normalmente associado a atividade hormonal sobre as glândulas da pele. Terapias atuais causam efeitos secundarios importantes alem de que a utilizacao indiscriminada de antimicrobianos e o surgimento de resistencia desfavorecem seu uso. Neste contexto, surge como um tratamento alternativo a terapia fotodinâmica antimicrobiana (aTFD) mediada por azul de metileno (AM), um fotossensibilizador (FS) amplamente estudado em biofilmes bacterianos. Objetivo: Avaliar in vitro a eficacia da terapia fotodinâmica sobre o biofilme de P. acnes utilizando azul de metileno como FS, irradiado por um sistema LED emissor de luz vermelha (660nm). Metodologia: O preparo e cultivo do biofilme foram realizados de acordo com a tecnica in vitro estabelecida por FONTANA et al., 2009. Nos experimentos de biofilme agregado, as concentracoes de FS foram adicionadas nos pocos, as amostras foram irradiadas e posteriormente cada poco foi cuidadosamente raspado com alca de inoculacao de 1 μL de forma que o biofilme fosse desprendido da base do agar e entao transferido para um microtubo onde foi realizada a diluicao seriada. O desagregado sofreu a raspagem e vigorosa homogeneizacao antes de receber o FS e irradiacao. Finalmente, uma aliquota de 5 μL da diluicao seriada ( ~102 cel./mL) foi plaqueada em Reinforced Clostridium Agar suplementado com hemina. As placas foram entao incubadas em anaerobiose a 37oC por 24 a 48 horas, e entao contadas as unidades formadoras de colonias (UFC/mL). Para a analise estatistica foi utilizado teste de Analise de Variância (one way ANOVA), com pos Teste de Tukey. O nivel de significância adotado para os testes estatisticos foi de 5%, ou seja, p<0.05. Resultados e discussao: As concentracoes de AM testadas foram: 50, 75, 100, 150 e 200 μg/mL associadas a uma dose de luz de 150 J/cm2. Os tempos de incubacao com o FS foram de 10, 20 e 30 minutos. Neste estudo, a aTFD apresentou reducao bacteriana de 1,3 Log10 UFC/mL no biofilme agregado apenas apos 30 minutos de incubacao na concentracao de 200 μg/mL de AM, porem, essa reducao nao foi estatisticamente significante. Foi observado no biofilme desagregado a mesma reducao com metade da concentracao de AM, ou seja, 100 μg/mL, sendo, neste caso, estatisticamente significante (p<0,05). A desagregacao da estrutura do biofilme possivelmente permitiu maior contato do FS com a parede bacteriana e concentracoes maiores de AM nao foram mais eficazes provavelmente pelo impedimento da passagem da luz. Conclusao: A aTFD nao foi eficaz para eliminar o biofilme de P. acnes, porem, quando o mesmo biofilme foi submetido a desagregacao da sua estrutura, o tratamento apresentou reducao bacteriana significativa.