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Implementação de estudos de metabolismo in vitro: Comparação da adição de NADPH e sistema regenerador de NADPH

2017; UNIVERSIDADE EST.PAULISTA JÚLIO DE MESQUITA FILHO; Volume: 38; Linguagem: Português

2179-443X

Bruna Cristina Ulian Silva, Taísa Busaranho Franchin, Evelin dos Santos Martins, Jonata Augusto de Oliveira, Caroline Damico Cândido, Elias Carvalho Padilha, Michel Leandro de Campos, Rosângela Gonçalves Peccinini,

Pharmacological Effects and Toxicity Studies

Introducao: Cerca de 40% do insucesso da introducao de novos farmacos no mercado esta relacionado a elevada toxicidade e caracteristicas farmacocineticas inadequadas, e estas caracteristicas podem ser investigadas atraves de ensaios in vitro e in vivo. Os estudos in vitro contribuem para a diminuicao dos custos do desenvolvimento de novos produtos e reducao do numero de animais. Considerando que o metabolismo interfere em parâmetros farmacocineticos como clearance, meia-vida e biodisponibilidade, a implementacao de ensaios in vitro de estabilidade metabolica constitui importante ferramenta para selecionar, dentre as novas moleculas, as mais promissoras a continuidade do desenvolvimento. A metodologia mais utilizada nesse tipo de avaliacao consiste no uso de microssomas, parte do hepatocito que contem a maior parte das enzimas responsaveis pelo metabolismo de xenobioticos. Nesses ensaios, e necessaria a adicao de NADPH, coenzima fornecedora de equivalentes redutores nas reacoes de biotransformacao de farmacos. No entanto, existem duas formas de procedimentos para a realizacao do ensaio de estabilidade metabolica: com a adicao direta do NADPH ou com a adicao do sistema regenerador de NADPH. A primeira, apesar de tornar o experimento mais simples e preciso, gera altos custos alem de incertezas na confiabilidade dos resultados, uma vez que as moleculas analisadas, por serem novas, tem as suas caracteristicas desconhecidas e, portanto, nao se sabe a quantidade necessaria de NADPH para transcorrer todo o ensaio. A ultima, em contrapartida, recicla a coenzima no decorrer do ensaio, portanto nao permite esgotar o NADPH, porem e um sistema que requer preparo pelo pesquisador, aumentando o numero de interferentes. Diante do pressuposto, o grupo de pesquisa da FCFAr/UNESP comparou os dois procedimentos de estudo de estabilidade metabolica in vitro, para confirmar a robustez e confiabilidade do sistema regenerador de NADPH. Objetivo: Comparar ensaios de estabilidade metabolica em microssomas, usando diclofenaco de sodio como farmaco modelo, nas duas situacoes distintas: com a adicao de NADPH e com a adicao do sistema regenerador de NADPH. Metodologia: Avaliacao do decaimento dos niveis do diclofenaco de sodio nos ensaios com a adicao direta do NADPH e com a adicao do sistema regenerador de NADPH, por ser um farmaco amplamente utilizado em estudos de metabolizacao nessas duas situacoes. A quantificacao foi atraves da analise por LC-MS/MS. Resultados e discussao: O sistema de NADPH adicionado direto e o sistema regenerador de NADPH apresentaram resultados semelhantes, portanto o sistema regenerador nao apresentou nenhuma interferencia na estabilidade metabolica do farmaco. Conclusao: O sistema regenerador analisado pode ser utilizado para posteriores estudos de estabilidade metabolica in vitro, contribuindo na diminuicao dos custos do experimento.