Miconazole‐tolerant strains of Malassezia pachydermatis generated by culture in medium containing miconazole
2019; Wiley; Volume: 31; Issue: 2 Linguagem: Inglês
10.1111/vde.12805
ISSN1365-3164
Autores Tópico(s)Antifungal resistance and susceptibility
ResumoTolerance of Malassezia pachydermatis to azole drugs has been reported worldwide, from strains isolated from dogs. Canine Malassezia dermatitis often is treated with shampoos containing 2% miconazole (MCZ) or other topical MCZ products.In the in vitro study herein, it was investigated whether MCZ-induced amino acid substitutions in the lanosterol 14-alpha-demethylase (ERG11) gene 1 lead to azole tolerance in M. pachydermatis.Toleranced to MCZ was induced in an azole-susceptible strain of M. pachydermatis (CBS1879T ) by culture in medium containing MCZ. Antifungal susceptibility to MCZ, clotrimazole (CTZ) and itraconazole (ITZ) was assessed using the modified broth microdilution (BM) method. To assess the potential mechanism of tolerance in the three MCZ-resistant strains, ERG11 was sequenced. The interaction between the calcineurin inhibitor tacrolimus and MCZ in the azole-tolerant isolates also was examined.Three strains (NUBS19001 to NUBS19003) from CBS1879T cultured in medium containing MCZ exhibited minimum inhibitory concentrations (MICs) of 40 mg/L to MCZ, 5 mg/L to ITZ and >32 mg/L to CTZ, meaning that the isolates were tolerant. The combination of MCZ and tacrolimus exerted an indifferent effect against the MCZ-tolerant strain. BLAST analysis using the NCBI database showed mutations in the cytochrome p450 encoded by ERG11 in the MCZ-tolerant strains.In the present in vitro study, it was shown that MCZ exposure can induce amino acid substitutions in ERG11 and subsequent tolerance of M. pachydermatis to several azoles. Whether topical therapy with azole-containing products can exert a similar effect in vivo is a question that requires further research.La tolérance de Malassezia pachydermatis aux azolés est rapportée de souches isolées du chien. Une dermatite à Malassezia canine est souvent traitée avec des shampooings contenant 2% de miconazole (MCZ) ou d'autres produits topiques avec MCZ.Dans cette étude in vitro, il a été étudié si les substitutions d'amino-acides induites par MCZ dans le gène 1 lanosterol 14-alpha-déméthylase (ERG11) mène à une tolérance aux azolés chez M. pachydermatis. MATÉRIELS ET MÉTHODES: La tolérance à MCZ a été induite dans les souches de M. pachydermatis (CBS1879T) sensibles aux azolés par culture en milieu contenant MCZ. Une sensibilité antifongique à MCZ, clotrimazole (CTZ) et itraconazole (ITZ) a été déterminée par méthode BM (broth microdilution). Pour déterminer le mécanisme potentiel de tolérance pour les trois souches résistantes à MCZ, ERG11 a été séquencé. L'interaction entre l'inhibiteur de calcineurine, tacrolimus, et MCZ dans les souches tolérantes aux azolés, a aussi été examinée. RÉSULTATS: Trois souches (NUBS19001 à NUBS19003) de CBS1879T cultivées dans le milieu contenant MCZ ont présenté des CMI (concentrations minimales inhibitrices) de 40 mg/L à MCZ, 5 mg/L à ITZ et >32 mg/L à CTZ, ce qui signifie que les souches étaient tolérantes. La combinaison de MCZ et de tacrolimus a présenté un effet indifférent contre les souches tolérantes à MCZ. Les analyses BLAST utilisant les données de NCBI ont montré des mutations dans le cytochrome p450 codé par ERG11 dans les souches tolérantes à MCZ.Dans cette étude in vitro, il a été montré que l'exposition à MCZ peut induire des substitutions d'acides aminés dans ERG11 et une tolérance subséquente de M. pachydermatis à plusieurs azolés. Si le traitement topique avec des produits contenant des azolés peut entrainer un effet in vivo est une question qui nécessite davantage de recherches.INTRODUCCIÓN: se ha informado sobre la tolerancia de Malassezia pachydermatis a los fármacos azólicos en todo el mundo, a partir de cepas aisladas de perros. La dermatitis por Malassezia canina a menudo se trata con champús que contienen 2% de miconazol (MCZ) u otros productos tópicos de MCZ. OBJETIVOS: en el estudio in vitro en este artículo, se investigó si las sustituciones de aminoácidos inducidas por MCZ en el gen 1 de lanosterol 14-alfa-demetilasa (ERG11) produce la tolerancia a los azoles en M. pachydermatis. MÉTODOS Y MATERIALES: se indujo tolerancia a MCZ en una cepa de M. pachydermatis (CBS1879T) susceptible a azol por cultivo en medio que contenía MCZ. La susceptibilidad antifúngica a MCZ, clotrimazol (CTZ) e itraconazol (ITZ) se evaluó utilizando el método de microdilución de caldo modificado (BM). Para evaluar el posible mecanismo de tolerancia en las tres cepas resistentes a MCZ, se secuenció el gen ERG11. También se examinó la interacción entre el inhibidor de calcineurina tacrolimus y MCZ en los aislados tolerantes a azol. RESULTADOS: tres cepas (NUBS19001 a NUBS19003) de CBS1879T cultivadas en medio que contenía MCZ exhibieron concentraciones inhibitorias mínimas (MICs) de 40 mg/L a MCZ, 5 mg/L a ITZ y >32mg/L a CTZ, lo que significa que los aislamientos fueron tolerantes. La combinación de MCZ y tacrolimus ejerció un efecto indiferente frente a la cepa tolerante a MCZ. El análisis BLAST utilizando la base de datos NCBI mostró mutaciones en el citocromo p450 codificado por ERG11 en las cepas tolerantes a MCZ. CONCLUSIONES: en el presente estudio in vitro, se demostró que la exposición a MCZ puede inducir sustituciones de aminoácidos en ERG11 y la posterior tolerancia de M. pachydermatis a varios azoles. Si la terapia tópica con productos que contienen azol puede producir un efecto similar in vivo es una cuestión que requiere más investigación.Die Toleranz von Malassezia pachydermatis zu Azol Medikamenten wurde für Stämme, die von Hunden isoliert worden waren, weltweit beschrieben. Die Malasseziendermatitis des Hundes wird häufig mit Shampoos behandelt, die 2% Mikonazol (MCZ) enthalten oder mit anderen topischen MCZ Produkten.In dieser in vitro Studie wurde untersucht, ob MCZ-induzierte Aminosäuresubstitutionen beim Lanosterol 14-alpha-Demethylase (ERG11) Gen 1 zu Azoltoleranz bei M. pachydermatis führt.Eine Toleranz zu MCZ wurde bei einem Azol-empfindlichen Stamm von M. pachydermatis (CBS 1879T ) mittels Kultur in einem Medium, welches MCZ beinhaltete induziert. Die antimykotische Empfindlichkeit auf MCZ, Clotrimazol (CTZ) und Itrakonazol (ITZ) wurde mittels modifizierter Mikrodilutionsbouillon-Methode (BM) untersucht. Um die möglichen Mechanismen der Toleranz bei den drei MCZ-resistenten Stämmen zu untersuchen, wurde ERG11 sequenziert. Die Interaktion zwischen dem Calcineurin Inhibitor Takrolimus und MCZ bei den Azol-toleranten Isolaten wurde untersucht.Drei Stämme (NUBS 19001 bis NUBS 19003), die in einem Medium kultiviert wurden, welches MCZ enthielt, zeigten eine minimale Hemmkonzentration (MICs) von 40 mg/L auf MCZ, 5 mg/L auf ITZ und > 32 mg/L auf CTZ, was bedeutet, dass die Isolate tolerant waren. Die Kombination von MCZ und Takrolimus zeigten eine neutrale Wirkung gegenüber MCZ-toleranten Stämmen. Die BLAST Analyse mit Verwendung der NCBI Datenbank zeigte Mutationen im Cytochrom p450, welches durch ERG11 in den MCZ-toleranten Stämmen kodiert ist.In der vorliegenden in vitro Studie wurde gezeigt, dass eine MCZ Exponierung Aminosäuresubstitutionen bei ERG11 induzieren kann und in der Folge eine Toleranz von M. pachydermatis zu verschiedenen Azolen. Ob die topische Therapie mit Azol-hältigen Produkten eine ähnliche Wirkung in vivo bewirken kann ist eine Fragestellung für zukünftige Forschungen.背景: Malassezia pachydermatisのアゾール系抗真菌薬耐性は、犬分離株から世界中で報告されている。犬のマラセチア皮膚炎は、多くの場合、2%ミコナゾール(MCZ)または他の外用MCZ産物を含むシャンプーで治療されている。 目的: 研究の目的は、in vitro試験において、ラノステロール14-α-デメチラーゼ(ERG11)遺伝子1のMCZ誘導アミノ酸置換がM. pachydermatisのアゾール耐性をもたらすかを調査することであった。 材料と方法: MCZに対する耐性を、MCZ含有培地で培養することによりM. pachydermatisのアゾール感受性株(CBS1879T)に誘導した。 MCZ、クロトリマゾール(CTZ)およびイトラコナゾール(ITZ)に対する抗真菌薬感受性試験を修正微量液体希釈法(BM)により評価した。 MCZ耐性株3株の潜在的耐性メカニズムを評価するため、ERG11配列を決定した。アゾール耐性分離株におけるカルシューニン阻害剤であるタクロリムスとMCZの相互作用も調査した。 結果: MCZ含有培地で培養したCBS1879Tの3株(NUBS19001〜NUBS19003)は、MCZに対して40 mg / L、ITZに対して5 mg / L、CTZに対して32 mg / Lを超える最小発育阻止濃度(MIC)を示し、3株が耐性株であることを意味した。 MCZとタクロリムスの併用は、MCZ耐性株に対して無関係な効果を発揮した。 NCBIデータベースを使用したBLAST解析により、MCZ耐性株のERG11にコードされたチトクロームp450の変異を示した。 結論: 研究によるin vitro研究によって、MCZ曝露がERG11のアミノ酸置換を誘導し、続いて生じるMalassezia pachydermatisのいくつかのアゾール系抗真菌薬に対する耐性を誘導できることが示された。アゾール含有製品による局所療法が生体内で同様の効果を発揮できるかどうかは、さらなる研究を必要とする問題である。.背景: 从犬身上分离的厚皮马拉色菌对唑类药物的耐受性在世界范围内均有报道。用含2%咪康唑(MCZ)的香波或其他MCZ外用产品治疗犬马拉色菌性皮炎是常态。 目的: 在本文的体外研究中,研究了羊毛醇14-α-脱甲基酶(ERG11)基因1中MCZ诱导的氨基酸替代,是否会导致厚皮马拉色菌对唑类耐受。 方法和材料: 通过在含MCZ的培养基中培养对唑类药物敏感的菌株(CBS1879T ),诱导其对MCZ产生耐受性。 采用改良的肉汤微量稀释(BM)法评估对MCZ、克霉唑(CTZ)和伊曲康唑(ITZ)的抗真菌敏感性。 为了评估三种耐MCZ菌株的潜在耐药机制,对ERG11进行测序。 同时检查唑类耐药分离株中钙调磷酸酶抑制剂他克莫司和MCZ之间的相互作用。 结果: 三种CBS1879T的菌株(NUBS19001至NUBS19003)在含有MCZ的培养基中,MCZ、ITZ和CTZ的最小抑菌浓度(MIC)分别为40 mg / L、5 mg/L和> 32 mg / L,说明菌株具有一定耐药性。MCZ和他克莫司联用对MCZ耐药菌株的影响不显著。使用NCBI数据库进行BLAST分析显示,耐MCZ株中ERG11编码的细胞色素p450发生了突变。 结论: 在目前的体外研究中,使用MCZ可诱导ERG11中的氨基酸替代,并随后引起厚皮马拉色菌对几种唑类的耐受性。外部治疗使用含唑类产品,能否在活体上发挥相似的作用,是一个有待进一步研究的问题。.A tolerância de Malassezia pachydermatis a medicamentos azólicos foi relatada em todo o mundo a partir de cepas isoladas de cães. A dermatite por Malassezia em cães geralmente é tratada com shampoos contendo 2% de miconazol (MCZ) ou outros produtos tópicos com MCZ.No presente estudo in vitro, investigou-se se as substituições de aminoácidos induzidas por MCZ no gene 1 da lanosterol 14-alfa-desmetilase (ERG11) geram tolerância ao azol nas cepas de M. pachydermatis. MÉTODOS E MATERIAIS: Tolerância ao MCZ foi induzida em uma cepa de M. pachydermatis (CBS1879T), suscetível ao azol, por cultura em meio contendo MCZ. A suscetibilidade antifúngica ao MCZ, clotrimazol (CTZ) e itraconazol (ITZ) foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo modificado (BM). Para avaliar o mecanismo de tolerância potencial nas três cepas resistentes a MCZ, o ERG11 foi sequenciado. A interação entre o inibidor da calcineurina tacrolimus e MCZ nos isolados tolerantes ao azol também foi avaliada.Três cepas (NUBS19001 a NUBS19003) de CBS1879T cultivadas em meio contendo MCZ exibiram concentrações inibitórias mínimas (MICs) de 40 mg / L de MCZ, 5 mg / L de ITZ e> 32 mg / L de CTZ, o que demonstrou que os isolados eram tolerantes. A combinação de MCZ e tacrolimus apresentou um efeito indiferente contra a cepa tolerante a MCZ. A análise BLAST utilizando o banco de dados NCBI mostrou mutações no citocromo p450 codificado por ERG11 nas cepas tolerantes a MCZ. CONCLUSÕES: No presente estudo in vitro, foi demonstrado que a exposição ao MCZ pode induzir substituições de aminoácidos no ERG11 e subsequente tolerância de M. pachydermatis a vários azóis. Mais pesquisas são necessárias para se avaliar se a terapia tópica com produtos contendo azol pode exercer um efeito semelhante in vivo.
Referência(s)