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Glicosilación en células de glándula mamaria: potencialidades y limitaciones para la expresión de proteínas de interés biofarmacéutico

2008; Elfos Scientiae; Volume: 25; Issue: 4 Linguagem: Espanhol

0864-4551

José A. Cremata, Raquel Montesino, Jorge R. Toledo, Oliberto Sánchez, Elsa Rodríguez, María P. Rodríguez,

T-cell and Retrovirus Studies

El analisis de la N-glicosilacion de la eritropoyetina humana (EPOh) recombinante, expresada mediante transduccion adenoviral de celulas epiteliales mamarias de una linea celular de cabra no transformada (linea GMGE; EPOh- GMGE) y en la leche de cabra (EPOh-Lc), se realizo mediante separacion en HPLC en fase normal Amida-80 e intercambio anionico de los oligosacaridos liberados enzimaticamente. Luego, estos oligosacaridos se marcaron con el fluoroforo acido 4-aminobenzoico (4ABA) y su estructura se evaluo por espectrometria de masas MALDI, ESIMS y LC/MS. Las estructuras de los N-glicanos mas abundantes de la EPOh-GMGE son de tipo multiantenarias monosialiladas, fucosiladas en el nucleo y tambien en las antenas. La EPOh-Lc presento N-glicanos poco ramificados y fucosilados mayormente en el nucleo. La fraccion cargada mostro estructuras monosialiladas que contenian acido sialico en las formas N-Acetiladas y N-Glicoliladas en una relacion 1:1, principalmente enlazados α2,6 al extremo no reductor de la cadena oligosacaridica, mientras que en la EPOh-GMGE solo se detectaron acidos sialicos terminales en su forma N-Acetilada. Un hallazgo importante fue la presencia mayoritaria de N-glicanos biantenados con motivos de lactosadiamina (GalNAc-GlcNAc) neutros o sialilados en la EPOh-Lc, a diferencia de la EPOh-GMGE donde los N-glicanos con estos motivos resultaron minoritarios. Este tipo de terminal no reductor no ha sido descrito en la EPOh expresada en celulas CHO, donde los glicanos muestran estructuras multiantenarias altamente sialiladas. Estos hallazgos enfatizan la diferencia entre la poblacion de N-glicanos de una glicoproteina dada, en dependencia del tipo celular y el entorno en que esta se expresa