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Eine einfache Mikromethode zur Bestimmung des Gehalts von Kaninchenimmunserum an spezifischem IgG gegen bakterielle somatische Antigene mit Hilfe der Enzym-Immunotechnik

2010; Wiley; Volume: 29; Issue: 3 Linguagem: Inglês

10.1111/j.1439-0450.1982.tb01220.x

0931-2021

Reinhard Böhm, E. Britzius,

Immune Response and Inflammation

Zusammenfassung Es wird eine Methode beschrieben, die geeignet ist, den mit Protein-A-Sepharose gewinnbaren Anteil von gegen somatische Bakterienantigene ge-richteten Antikörpern im Kaninchenserum zu quantifizieren. Am Beispiel von vegetativem Milzbrandantigen wird gezeigt, daß langsam (mindestens 8 h) bei 70–80 °C an die Wände von Mikrotestplatten mit flachem Boden angetrocknetes, ultraschallzerkleinertes, photometrisch standardisiertes Zellmaterial als stationäre Phase für einen Enzym-Immunotest zu verwenden ist. Das an das Antigen gebundene spezifische IgG wird bei der Titration der Seren mittels peroxidasemarkiertem Protein A nachgewiesen, wobei eine 1%ige 5-Aminosalicylsäurelösung in einem Spezialpuffer mit 0,05 % H2O2 zur Farbreaktion mit der Peroxidase verwendet wird. Summary A simple micromethod for the determination of specific IgG against somatic antigens of bacteria in rabbit immune sera by a modified enzyme-immunoassay A method is described by which the amount of protein A-Sepharose-detectable specific antibodies against bacterial somatic antigens could be determined in rabbit immunsera. It was demonstrated that ultrasonically treated and photometrically standardized material of vegetative cells of Bac. anthracis could be fixed by slow drying (at least 8 h) at 70—80 °C to the walls of the wells of microtest plates so that it can be used as the stationary phase for an enzyme-immunoassay. The antigen-fixed specific IgG from the titrated sera is detected by peroxidase labelled protein A with the help of a colour reaction with a 1% 5-aminosalicylic acid solution in a special buffer containing 0.05% H2O2. Resumen Un micrométodo simple para determinar el contenido del suero inmune de conejo en IgG específicas frente a los antígenos bacterianos somáticos con ayuda de la técnica enzimo-inmunitaria Se describe un método apropiado para cuantificar la parte de anticuerpos en el suero sanguíneo inmune de conejo, detectable con proteína A-sefarosis, dirigida contra los antígenos bacterianos somáticos. En el ejemplo del antígeno vegetativo de Bac. anthracis se señala que ha de emplearse como fase estacionaria para una prueba enzimo-inmunitaria material celular desmenuzado con ultrasonido, estandarizado fotométricamente, desecado con lentitud (8 h como mínimo) a 70–80 °C en las paredes de placas para microtests con fondo plano. Se detecta la IgG específica fijada al antígeno en la titulación de los sueros mediante proteína A marcada con peroxidasa, utilizando para la reacción cromática con la peroxidasa una solución de ácido 5-amino-salicílico al 1% en un tampón especial con H2O2 al 0,05%.