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Acoplamento das unidades catalítica e regulatória do proteassomo e a funcionalidade mitocondrial em leveduras após mutações sítio-específicas na unidade catalítica do proteassomo

2023; UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO; Volume: 102; Issue: esp Linguagem: Português

10.11606/issn.1679-9836.v102iespe-204164

1679-9836

Natalia Mori Avellaneda Penatti, Marilene Demasi,

Phytase and its Applications

Em leveduras da espécie S. cerevisiae, foi descrito uma modificação redox pós-traducional denominada S-glutationilação em resíduos Cys da subunidade α5 da unidade catalítica 20S do proteassomo, especificamente o resíduo α5-C76, posteriormente mutada para α5-C76S. A linhagem carregando essa mutação apresentou como alteração fenotípica um menor tempo de vida cronológico (CLS: chronological life span) e uma maior frequência da conformação fechada da câmara catalítica da unidade 20S. Uma dupla mutação randômica na subunidade α5 (α5-S35P/C221S) criou uma linhagem duplo-mutante (DM), a qual induziu a abertura da câmera catalítica do 20S e também aumentou o CLS da célula. O presente estudo teve como objetivo estudar o grau de acoplamento entre as unidades catalítica e regulatória do proteassomo nas linhagens de levedura (C76S, WT e DM), bem como avaliar a funcionalidade mitocondrial em todas elas. A análise do acoplamento foi feita com eletroforese em gel nativo. Para determinar a funcionalidade mitocondrial, foi medida a atividade da enzima citrato sintase a partir da reação entre DTNB e CoA-SH. Foi observado que na linhagem C76S com CLS reduzido havia um menor grau de acoplamento entre as unidades catalítica 20S e regulatória 19S, além de uma atividade mitocondrial diminuída. Portanto, um menor grau de acoplamento entre as unidades do proteassomo muito provavelmente provocou uma disfunção mitocondrial devido a um importe de proteínas mitocondriais defeituoso, resultando em uma CLS reduzida, fato que pode melhor elucidar a nossa compreensão acerca do processo de envelhecimento e da morte celular prematura vista em doenças degenerativas causadas por acumulação proteica.