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VARIANTES DE PREOCUPAÇÃO DO SARS-COV-2: IDENTIFICAÇÃO PRESUNTIVA POR MEIO DA ANÁLISE POR SEQUENCIAMENTO DE SANGER DA REGIÃO DE LIGAÇÃO AO DOMÍNIO DO RECEPTOR (RBD) DO GENE S

2022; Medical Association of São Paulo; Linguagem: Português

10.5327/1516-3180.140s1.6130

1806-9460

GM Rodrigues, FCZ Volpato, PL Wink, RM Paiva, AL Barth, Fernanda de Paris,

Healthcare during COVID-19 Pandemic

Objetivo: Caracterizar as VOCs por meio de sequenciamento de sanger da região RBD, bem como estabelecer a concordância com resultados obtidos por sequenciamento completo do genoma viral através da técnica de whole-genome sequencing (WGS). Método: O RNA viral de amostras positivas foi isolado e submetido à transcrição reversa, utilizando o kit GoScript™ Reverse Transcriptase. A PCR foi realizada utilizando primers que flanqueiam a região genômica RBD do vírus, formando um fragmento de 1006 pares de base. Eletroforese em gel de agarose 1% foi realizada para confirmar a amplificação, e o amplificado foi purificado utilizando a enzima ExoSAP-IT™ PCR Product Cleanup; em seguida, foi encaminhado para sequenciamento. As sequências obtidas foram alinhadas com as sequências de referência NC_045512.2 e NC_045512.2:21563-25384 através do software BioEdit Alignment Editor, v.7.2. O sequenciamento de todo o genoma (WGS) foi usado como padrão para a comparação dos resultados do sequenciamento de sanger. Conclusão: Trinta e cinco amostras foram sequenciadas, sendo: oito classificadas como variante gama (P.1); sete como variante delta (B.617.2); sete como variante ômicron (BA.1); e 13 como não VOC. Todas as amostras tiveram o resultado pelo sequenciamento de sanger parcial concordante com o resultado do sequenciamento completo por WGS. Foi possível realizar a caracterização das principais VOCs do Sars-CoV-2 circulantes no momento por meio do sequenciamento de sanger parcial na região RBD da espícula viral, obtendo-se 100% de concordância com o WGS. Assim, para as VOCs descritas até o momento, o sequenciamento de sanger pode ser usado como uma ferramenta importante na triagem e na identificação. Caso novas VOCs com alterações na porção RBD tenham circulação descrita, esse mesmo protocolo poderá ser aplicado para sua predição e discriminação. Portanto, esta é uma técnica habilitada para realizar a vigilância e o monitoramento genômico de Sars-CoV-2.